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tangchaoxi

新虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】酶连转化

我将载体和片段分别用同样的两个酶双酶切后酶连,转化子提质粒酶切验证,结果只有一个条带,大概载体那么大,怀疑是不是载体自连了?如果是的话,我如何避免载体自连,把我的目的片段连上去呢?请各位帮帮忙…
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yabxxh

木虫 (正式写手)


tangchaoxi(金币+2): 2011-03-24 16:52:26
引用回帖:
Originally posted by yabxxh at 2011-03-24 14:03:39:
这个的话建议酶切时间在四个小时以上,以保证酶切的彻底,另外你的目的片段浓度要足够的高,最关键的就是载体和目的片段的比例了,我一般是用肉眼观察,然后决定二者的用量,当然还有极端派会去测od,然后算出精确 ...

我的意思是你连接之前的酶切要彻底,另外,做一个对照,转个质粒,看看感受态有没有问题。
9楼2011-03-24 15:44:27
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)


tangchaoxi(金币+1): 2011-03-24 15:32:38
载体酶切后加CIP处理
2楼2011-03-24 11:59:39
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wqj1988926

金虫 (正式写手)


对连接产物筛选,一般不是都有一些抗性基因连接后表达之类的,
3楼2011-03-24 12:55:58
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whyann

银虫 (初入文坛)


tangchaoxi(金币+2): 2011-03-24 15:30:25
既然是双酶切,产生的应该是不同的粘性末端,怎么会自连,应该是其他问题,楼主好好回忆每步
4楼2011-03-24 13:13:53
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