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tangchaoxi

新虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】酶连转化

我将载体和片段分别用同样的两个酶双酶切后酶连,转化子提质粒酶切验证,结果只有一个条带,大概载体那么大,怀疑是不是载体自连了?如果是的话,我如何避免载体自连,把我的目的片段连上去呢?请各位帮帮忙…
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tangchaoxi

新虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by whyann at 2011-03-24 13:13:53:
既然是双酶切,产生的应该是不同的粘性末端,怎么会自连,应该是其他问题,楼主好好回忆每步

谢谢!如果不是自连,那肯定是连上目的片段了,因为载体有抗性啊,没连上的话是不会转化出来的对吗?
7楼2011-03-24 15:31:51
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)


tangchaoxi(金币+1): 2011-03-24 15:32:38
载体酶切后加CIP处理
2楼2011-03-24 11:59:39
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wqj1988926

金虫 (正式写手)


对连接产物筛选,一般不是都有一些抗性基因连接后表达之类的,
3楼2011-03-24 12:55:58
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whyann

银虫 (初入文坛)


tangchaoxi(金币+2): 2011-03-24 15:30:25
既然是双酶切,产生的应该是不同的粘性末端,怎么会自连,应该是其他问题,楼主好好回忆每步
4楼2011-03-24 13:13:53
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