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tangchaoxi

新虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】酶连转化

我将载体和片段分别用同样的两个酶双酶切后酶连，转化子提质粒酶切验证，结果只有一个条带，大概载体那么大，怀疑是不是载体自连了？如果是的话，我如何避免载体自连，把我的目的片段连上去呢？请各位帮帮忙…

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1楼 2011-03-24 11:13:38

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tangchaoxi

新虫 (小有名气)

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虫号: 1205905

引用回帖:

Originally posted by whyann at 2011-03-24 13:13:53:
既然是双酶切，产生的应该是不同的粘性末端，怎么会自连，应该是其他问题，楼主好好回忆每步

谢谢！如果不是自连，那肯定是连上目的片段了，因为载体有抗性啊，没连上的话是不会转化出来的对吗？

7楼2011-03-24 15:31:51

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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

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tangchaoxi(金币+1): 2011-03-24 15:32:38

载体酶切后加CIP处理

2楼2011-03-24 11:59:39

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wqj1988926

金虫 (正式写手)

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对连接产物筛选，一般不是都有一些抗性基因连接后表达之类的，

3楼2011-03-24 12:55:58

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whyann

银虫 (初入文坛)

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tangchaoxi(金币+2): 2011-03-24 15:30:25

既然是双酶切，产生的应该是不同的粘性末端，怎么会自连，应该是其他问题，楼主好好回忆每步

4楼2011-03-24 13:13:53

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