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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】酶连转化
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tangchaoxi

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】酶连转化

我将载体和片段分别用同样的两个酶双酶切后酶连，转化子提质粒酶切验证，结果只有一个条带，大概载体那么大，怀疑是不是载体自连了？如果是的话，我如何避免载体自连，把我的目的片段连上去呢？请各位帮帮忙…
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1楼 2011-03-24 11:13:38
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tangchaoxi

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by rioarsenal at 2011-03-25 17:21:39:
基因片段是检测不了，一般酶切也没啥问题。载体是可以检测的，酶切后，载体超螺旋和开环的带都应该消失，只有线状的带；酶切之前，应该是三条带。

非常感谢，这倒提醒我了。我是跟别人拿的质粒转到大肠杆菌，再提出来以备后用，当时提出来检测结果是一条带，别人的是三条带。因为这个载体有抗性，所以当时觉得转化子肯定没问题。质粒非得有三条带吗？
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18楼2011-03-25 21:48:25
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)
tangchaoxi(金币+1): 2011-03-24 15:32:38
载体酶切后加CIP处理
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2楼2011-03-24 11:59:39
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wqj1988926

金虫 (正式写手)
对连接产物筛选，一般不是都有一些抗性基因连接后表达之类的，
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3楼2011-03-24 12:55:58
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whyann

银虫 (初入文坛)
tangchaoxi(金币+2): 2011-03-24 15:30:25
既然是双酶切，产生的应该是不同的粘性末端，怎么会自连，应该是其他问题，楼主好好回忆每步
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4楼2011-03-24 13:13:53
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