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tangchaoxi

新虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】酶连转化

我将载体和片段分别用同样的两个酶双酶切后酶连,转化子提质粒酶切验证,结果只有一个条带,大概载体那么大,怀疑是不是载体自连了?如果是的话,我如何避免载体自连,把我的目的片段连上去呢?请各位帮帮忙…
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rioarsenal

金虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by tangchaoxi at 2011-03-25 08:48:04:
是连接前没有切开吗?

是啊,建议你酶切后,做个电泳看看是否切开
15楼2011-03-25 10:27:14
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)


tangchaoxi(金币+1): 2011-03-24 15:32:38
载体酶切后加CIP处理
2楼2011-03-24 11:59:39
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wqj1988926

金虫 (正式写手)


对连接产物筛选,一般不是都有一些抗性基因连接后表达之类的,
3楼2011-03-24 12:55:58
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whyann

银虫 (初入文坛)


tangchaoxi(金币+2): 2011-03-24 15:30:25
既然是双酶切,产生的应该是不同的粘性末端,怎么会自连,应该是其他问题,楼主好好回忆每步
4楼2011-03-24 13:13:53
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