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tangchaoxi

新虫 (小有名气)

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在线: 17.6小时
虫号: 1205905

[交流] 【求助/交流】酶连转化

我将载体和片段分别用同样的两个酶双酶切后酶连，转化子提质粒酶切验证，结果只有一个条带，大概载体那么大，怀疑是不是载体自连了？如果是的话，我如何避免载体自连，把我的目的片段连上去呢？请各位帮帮忙…

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1楼 2011-03-24 11:13:38

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rioarsenal

金虫 (正式写手)

BioEPI: 1
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虫号: 1169059

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

引用回帖:

Originally posted by tangchaoxi at 2011-03-25 08:48:04:
是连接前没有切开吗？

是啊，建议你酶切后，做个电泳看看是否切开

赞一下(1人)

15楼2011-03-25 10:27:14

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查看全部 25 个回答

gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

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虫号: 1082982

tangchaoxi(金币+1): 2011-03-24 15:32:38

载体酶切后加CIP处理

2楼2011-03-24 11:59:39

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

wqj1988926

金虫 (正式写手)

BioEPI: 2
应助: 40 (小学生)
金币: 1222
帖子: 929
在线: 225.6小时
虫号: 1156883

对连接产物筛选，一般不是都有一些抗性基因连接后表达之类的，

3楼2011-03-24 12:55:58

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whyann

银虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
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帖子: 20
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虫号: 1237706

tangchaoxi(金币+2): 2011-03-24 15:30:25

既然是双酶切，产生的应该是不同的粘性末端，怎么会自连，应该是其他问题，楼主好好回忆每步

4楼2011-03-24 13:13:53

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