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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】CTAB 法提取DNA，克隆基因全长？
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nnsulei

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】CTAB 法提取DNA，克隆基因全长？

CTAB 法 提取DNA结果不理想怎么回事？请各位高手指教。谢谢～
步骤：研磨，加样65度5毫升CTAB加1克研磨样品（有巯基乙醇）；温和混匀，65度30分钟，期间不时摇动使其混匀；加等体积的酚氯仿异戊醇抽提12000rpm/15min；取上清，加1/10体积的65度CTAB及加等体积的酚氯仿异戊醇抽提；重复之前步骤两次；取上清，沉淀；75%乙醇洗涤。


PS:基因组DNA做PCR容易吗？有CDNA全长序列，在基因组水平克隆带内含子的的全长，是否容易做？我已经用RACE方法克隆获得CDNA全长序列，但是基因组水平全长用跨ORF引物始终P不出来，求教，谢谢。

[ Last edited by nnsulei on 2011-3-27 at 10:55 ]
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1楼 2011-03-22 15:37:24
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rioarsenal

金虫 (正式写手)
★ ★
dhd997(金币+2): 很活跃，欢迎交流 2011-03-23 08:15:09
nnsulei(金币+2): 材料新鲜 2011-03-23 10:25:49
还可以啊，就是蛋白质多了点，还有点降解了。

方法也对。材料是否新鲜？
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6楼2011-03-23 08:05:20
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ls2046

铁杆木虫 (职业作家)
nnsulei(金币+1): 2011-03-22 15:53:13
看上去还可以啊，做PCR应该没有问题吧，我提的比你还烂都P出来了，呵呵
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2楼2011-03-22 15:50:42
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shan-sa

金虫 (正式写手)
★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-03-23 08:14:35
nnsulei(金币+3): 2011-03-23 10:24:58
结果还可以么~只是有轻微滴降解而已，操作过程有剧烈震荡，有降解就是难免的了，点样孔比较亮，应该是因为模板量较大造成的吧，不过，貌似有蛋白残余也会造成点样孔较亮~哈哈，做个PCR肯定么问题的啦~
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4楼2011-03-22 21:14:54
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xp198766

铁杆木虫 (著名写手)
★
dhd997(金币+1): 鼓励交流 2011-03-23 08:16:12
nnsulei(金币+1): 2011-03-23 10:25:33
已经很好了啊！P着试试看
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5楼2011-03-22 23:22:18
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