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972973115

金虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】DNS试剂

DNS试剂配制必须按顺序加入吗?配制好必须放置一星期才能使用吗?可以一配制好就使用吗?
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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我用碘做,酶活很强,可是几乎每次都全部变黑,我是按照一篇论文做的,具体是哪一个我忘了,不过我总结了下步骤,1。取4毫升0.5%可溶性淀粉。2.取10毫升PH9.0氢氧化钠甘氨酸的缓冲液。3。70摄氏度保温10分钟。4。加2毫升粗酶液。5.反应10分钟。6.加入0.2摩尔每升盐酸终止反应。7.取4毫升反应液加入1毫升卢氏碘液


你怎么知道酶活力很强?

第六步,加多少毫升?

碘液浓度?

多少纳米比色?

淀粉跟碘结合很敏感的,你的0.5%作为底物浓度不算很高,但跟碘结合可能算很高了。

有没有移液枪?反应体积太大,机动性很差。

关于DNS法,由于在测定酶活力的时候是加到缓冲液里的,你给出的那篇木糖标准液没有用缓冲液来配置,所以我对结果是有点怀疑的。而且人家是测定木糖,木糖和麦芽糖不知道还原性是不是一样,所以还是找找测定麦芽糖的吧。
12楼2011-03-21 10:05:51
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查看全部 19 个回答
★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢交流 2011-03-18 19:15:06
972973115(金币+5): 太谢谢你了,我用的是温水可以吗? 2011-03-18 20:19:04
必须按顺序配,要水浴加热,但不能超过50度,先加3,5-二硝基水杨酸后加氢氧化钠,反过来有沉淀,配好需放置,立刻使用测得数据不准确(和放一周后测有很大不同,我试过)。
2楼2011-03-18 19:09:42
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972973115

金虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by starseacow at 2011-03-18 19:09:42:
必须按顺序配,要水浴加热,但不能超过50度,先加3,5-二硝基水杨酸后加氢氧化钠,反过来有沉淀,配好需放置,立刻使用测得数据不准确(和放一周后测有很大不同,我试过)。

用温水可以吗?我加热搅拌对数据测定有影响吗?
3楼2011-03-18 20:20:40
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daodi07

木虫 (著名写手)


★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+1): 鼓励发帖交流。 2011-03-18 20:47:40
加热的时候要不停的搅拌,温度在45℃左右比较合适,加水杨酸的时候要缓慢加入,边加边搅拌……
4楼2011-03-18 20:34:38
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