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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】分子克隆后M13引物PCR扩增
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-超越beyond

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】分子克隆后M13引物PCR扩增

我用的载体是pMD 19  ,插入片段是16S，挑克隆后用通用M13引物扩增，结果死活扩不出来，快急死我了，大家有没有同样的情况。这应该怎么办啊
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1楼 2011-03-18 10:15:28
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)
★
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-19 09:35:09
-超越beyond(金币+1): 谢谢 2011-03-20 17:18:08
应该多挑几个克隆，有假阳性存在，比如有杂菌污染，或者16S根本没连上载体，实在不行楼主重连吧，少加点载体
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7楼2011-03-19 07:08:45
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
-超越beyond(金币+1): 谢谢 2011-03-19 17:04:16
重新挑取克隆试试。
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2楼2011-03-18 10:34:58
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-超越beyond

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-03-18 10:34:58:
重新挑取克隆试试。

重新挑了还是不行啊
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3楼2011-03-18 10:59:57
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振子

新虫 (小有名气)

你好

-超越beyond(金币+1): 谢谢 2011-03-19 17:04:05
你所谓的扩不出来是没有阳性是吧？
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4楼2011-03-18 11:39:01
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-超越beyond12楼
2011-03-19 16:47   回复  
引用回帖:
Originally posted by zqhao2003 at 2011-03-19 00:02:56: 楼主是用的下面这对引物吗？可以用这对引物试试，Tm 55或53都可以。 M13F(-47) CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC M13R(-48) AGCGGATAACAATTTCACACAGGA 我们一般测序都是用这对引物的，很好用，扩PCR应该没有问题。 祝 ...

哦
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