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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助同源重组
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疯花血月

金虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】求助同源重组 已有2人参与

现在在利用同源重组做细菌的缺失，
但是发现第一次单交换后，设计多重PCR检测单交换，发现在上游和下游都发生了单交换，推断基因组整合了2个改造的质粒。那这样会不会在第二次单交换的时候回复突变的概率更大呢？
请大家指点下
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1楼 2011-03-17 09:00:37
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疯花血月

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by scelab at 2011-03-17 09:10:01:
建议重新筛选单交换株多重的解释不清楚的~~~

回复突变，要看你的同源重组指导序列的构成了。如果仅仅是缺失，而不是缺失加插入一段别的序列，回复突变的概率还是蛮高的。多挑几个，批量PCR吧~~~

郁闷的是，我当时筛选了63个单交换株，结果全都是上下游都能检测到。但是有点我不明白的是，假如如我所说是基因组在2个位点整合了2个质粒，那我的PCR检测图的上下游产物条带亮度应该一样才是。可我的总是下游亮一些。
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3楼2011-03-17 09:41:57
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2): 鼓励 2011-03-17 13:58:13
建议重新筛选单交换株多重的解释不清楚的~~~

回复突变，要看你的同源重组指导序列的构成了。如果仅仅是缺失，而不是缺失加插入一段别的序列，回复突变的概率还是蛮高的。多挑几个，批量PCR吧~~~
赞一下(2人) 回复此楼
小木虫之有关部门负责人
2楼2011-03-17 09:10:01
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 疯花血月 at 2011-03-17 09:41:57:
郁闷的是，我当时筛选了63个单交换株，结果全都是上下游都能检测到。但是有点我不明白的是，假如如我所说是基因组在2个位点整合了2个质粒，那我的PCR检测图的上下游产物条带亮度应该一样才是。可我的总是下游亮 ...

无图无真相

把你缺失的片段以及所用引物做个结构图吧~~~帮你把把关
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小木虫之有关部门负责人
4楼2011-03-17 09:50:19
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疯花血月

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by scelab at 2011-03-17 09:50:19:
无图无真相

把你缺失的片段以及所用引物做个结构图吧~~~帮你把把关

另外一个引物在我们所构建质粒上，差不多在下游片段50bp位置，
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5楼2011-03-31 15:03:49
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