24小时热门版块排行榜    

查看: 1080  |  回复: 4

疯花血月

金虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】求助同源重组 已有2人参与

现在在利用同源重组做细菌的缺失,
但是发现第一次单交换后,设计多重PCR检测单交换,发现在上游和下游都发生了单交换,推断基因组整合了2个改造的质粒。那这样会不会在第二次单交换的时候回复突变的概率更大呢?
请大家指点下
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+2): 鼓励 2011-03-17 13:58:13
建议重新筛选单交换株多重的解释不清楚的~~~

回复突变,要看你的同源重组指导序列的构成了。如果仅仅是缺失,而不是缺失加插入一段别的序列,回复突变的概率还是蛮高的。多挑几个,批量PCR吧~~~
小木虫之有关部门负责人
2楼2011-03-17 09:10:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

疯花血月

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by scelab at 2011-03-17 09:10:01:
建议重新筛选单交换株多重的解释不清楚的~~~

回复突变,要看你的同源重组指导序列的构成了。如果仅仅是缺失,而不是缺失加插入一段别的序列,回复突变的概率还是蛮高的。多挑几个,批量PCR吧~~~

郁闷的是,我当时筛选了63个单交换株,结果全都是上下游都能检测到。但是有点我不明白的是,假如如我所说是基因组在2个位点整合了2个质粒,那我的PCR检测图的上下游产物条带亮度应该一样才是。可我的总是下游亮一些。
3楼2011-03-17 09:41:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 疯花血月 at 2011-03-17 09:41:57:
郁闷的是,我当时筛选了63个单交换株,结果全都是上下游都能检测到。但是有点我不明白的是,假如如我所说是基因组在2个位点整合了2个质粒,那我的PCR检测图的上下游产物条带亮度应该一样才是。可我的总是下游亮 ...

无图无真相

把你缺失的片段以及所用引物做个结构图吧~~~帮你把把关
小木虫之有关部门负责人
4楼2011-03-17 09:50:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

疯花血月

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by scelab at 2011-03-17 09:50:19:
无图无真相

把你缺失的片段以及所用引物做个结构图吧~~~帮你把把关

另外一个引物在我们所构建质粒上,差不多在下游片段50bp位置,



5楼2011-03-31 15:03:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 疯花血月 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料专业求调剂 +11 hanamiko 2026-03-18 11/550 2026-03-23 23:12 by peike
[考研] 材料/农业专业,07/08开头均可,过线就行 +3 呵唔哦豁 2026-03-23 4/200 2026-03-23 22:30 by 汪!?!
[考研] 0854电子信息求调剂 324 +3 Promise-jyl 2026-03-23 3/150 2026-03-23 13:43 by wangkm
[考研] 263求调剂 +6 yqdszhdap- 2026-03-22 9/450 2026-03-23 12:57 by yqdszhdap-
[考研] 求调剂材料学硕080500,总分289分 5+3 @taotao 2026-03-19 21/1050 2026-03-23 10:17 by 冠c哥
[考研] 315分,诚求调剂,材料与化工085600 +3 13756423260 2026-03-22 3/150 2026-03-22 20:11 by edmund7
[考研] 289材料与化工(085600)B区求调剂 +3 这么名字咋样 2026-03-22 4/200 2026-03-22 17:56 by 云民大李老师
[考研] 305分求调剂(食品工程) +4 Sxy112 2026-03-21 6/300 2026-03-22 15:26 by 无懈可击111
[考研] 269专硕求调剂 +6 金恩贝 2026-03-21 6/300 2026-03-22 14:31 by ColorlessPI
[考研] 求调剂 +5 Zhangbod 2026-03-21 7/350 2026-03-22 13:13 by Zhangbod
[考研] 303求调剂 +5 安忆灵 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:46 by 素颜倾城1988
[考研] 0805 316求调剂 +3 大雪深藏 2026-03-18 3/150 2026-03-21 18:55 by 学员8dgXkO
[考研] 330求调剂0854 +3 assdll 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:01 by 搏击518
[考研] 一志愿 西北大学 ,070300化学学硕,总分287,双非一本,求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:46 by JourneyLucky
[考研] 321求调剂 +9 何润采123 2026-03-18 11/550 2026-03-20 23:19 by JourneyLucky
[考研] A区线材料学调剂 +5 周周无极 2026-03-20 5/250 2026-03-20 21:33 by laoshidan
[考研] 一志愿西南交通 专硕 材料355 本科双非 求调剂 +5 西南交通专材355 2026-03-19 5/250 2026-03-20 21:10 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 @taotao 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:35 by JourneyLucky
[考研] 一志愿福大288有机化学,求调剂 +3 小木虫200408204 2026-03-18 3/150 2026-03-19 13:31 by houyaoxu
[考研] 本科郑州大学物理学院,一志愿华科070200学硕,346求调剂 +4 我不是一根葱 2026-03-18 4/200 2026-03-19 09:11 by 浮云166
信息提示
请填处理意见