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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】普通Taq酶突变率的问题
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夏尔list

金虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】普通Taq酶突变率的问题

1314bp的基因，我用普通Taq酶扩基因扩出来了条带，可是高保真的条带很淡。
我们实验室一般是先用普通taq酶扩，扩出来了，再换高保真酶，说是普通taq酶错配率较高。
可是我普通Taq酶扩出来好几次，但是高保真酶扩的条带都很淡。我想直接用普通Taq酶扩出来的条带回收去测序可以么？
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1楼2011-03-12 13:18:26
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路人甲007

木虫 (正式写手)
夏尔list(金币+1): 也只能这样了 2011-03-12 14:19:42
可以试试的啊  楼主  如果测序正确  就可以了
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2楼2011-03-12 13:37:00
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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)
★ ★
夏尔list(金币+1): 谢谢 2011-03-12 15:11:53
lstt09nk(金币+2): 有了更高级一点的试剂的时候普通试剂就显得有点矫情了~~呵呵,实际照样用~ 2011-03-12 15:32:15
高保真酶你是用什么做模板呢？PCR产物做模板还是质粒呀还是CDNA啊？如果是质粒和PCR产物的话，可以降低退火温度看会不会好点。
普通的TAQ酶，其实也没别人说的那么严重，当年没高保真酶的时候做克隆有普通酶就不错了，还不照样用呀。呵呵  突变率不是那么高的。
我们实验室之前做克隆都是用普通酶的，只是最近才买了高保真酶。普通酶一样做。
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3楼2011-03-12 14:25:38
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夏尔list

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 阿修罗Axuro at 2011-03-12 14:25:38:
高保真酶你是用什么做模板呢？PCR产物做模板还是质粒呀还是CDNA啊？如果是质粒和PCR产物的话，可以降低退火温度看会不会好点。
普通的TAQ酶，其实也没别人说的那么严重，当年没高保真酶的时候做克隆有普通酶就不 ...

模板是cDNA，嗯，谢谢了~我先拿去测序吧，看结果了
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4楼2011-03-12 15:12:53
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susizheng

木虫 (著名写手)
普通Taq酶千分之一的错配率好像，问题不大。
现在高保真高活性的酶不是也有嘛。
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5楼2011-03-14 10:41:28
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)
夏尔list(金币+1): 期待RP爆发 2011-03-14 16:53:52
实际上1000个bp的片段Taq酶基本无错配，除非是运气不好
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6楼2011-03-14 11:32:59
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