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321wangke321

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】兼并引物 已有4人参与

我设计了兼并引物,是用蛋白序列设计的,现在想知道引物在序列上的位置,因为不知道扩增片段的长度。如果用比对软件,如何使用呢?我用过Blast及其它软件,都得不到结果,请教下哪位前辈可以给我些指导。谢谢!
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王者风范,一切皆有可能。
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yabxxh

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-03-11 20:49:26
这位同学,你设计兼并引物的目的是什么呢?是想像特异引物那样从基因组中扩增到特定长度的片段吗?既然是简并引物,那就说明你只是知道某类基因的保守氨基酸序列,你要用这段氨基酸的序列,扩增到你需要的基因。那你为什么还要知道基因的长度呢,你去Blast的话,也只能去Blast那段保守的氨基酸序列吧。不知道你想用什么方法来克隆你的基因,你不会想直接用简并引物扩增出来吧。我觉得你用简并引物扩增的序列测序之后还要进行5‘和3’RACE才能得到你的基因,仅供参考,好运
2楼2011-03-11 14:50:46
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love_st

金虫 (著名写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 321wangke321 at 2011-03-11 14:12:35:
我设计了兼并引物,是用蛋白序列设计的,现在想知道引物在序列上的位置,因为不知道扩增片段的长度。如果用比对软件,如何使用呢?我用过Blast及其它软件,都得不到结果,请教下哪位前辈可以给我些指导。谢谢!

就用你参考的序列上的位置,因为是兼并的,那你一定是经过比对的
3楼2011-03-11 15:17:32
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321wangke321

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by yabxxh at 2011-03-11 14:50:46:
这位同学,你设计兼并引物的目的是什么呢?是想像特异引物那样从基因组中扩增到特定长度的片段吗?既然是简并引物,那就说明你只是知道某类基因的保守氨基酸序列,你要用这段氨基酸的序列,扩增到你需要的基因。那 ...

谢谢,新手,学习了
王者风范,一切皆有可能。
4楼2011-03-11 18:36:52
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321wangke321

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by love_st at 2011-03-11 15:17:32:
就用你参考的序列上的位置,因为是兼并的,那你一定是经过比对的

明白了,谢谢
王者风范,一切皆有可能。
5楼2011-03-11 18:37:28
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wangleisdnu

金虫 (正式写手)

Cloning Gene Family i\/lembers Using PCR with Degenerate Oligonucleotide Primers

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and read it
有勇气去改变你可以改变的,有度量去容忍你不能改变的,有智慧去区分上面的两种情况http://bbs.bioon.net/bbs/?66210
6楼2011-03-11 20:05:33
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321wangke321

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by wangleisdnu at 2011-03-11 20:05:33:
Cloning Gene Family i\/lembers Using PCR with Degenerate Oligonucleotide Primers

get this paper
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谢谢指点,可惜我从Springlink下不下来,能不能发给一份我啊,很想看,谢谢了。
王者风范,一切皆有可能。
7楼2011-03-11 20:27:21
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