24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

麦兜响当当

金虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 565.6
帖子: 22
在线: 2.5小时
虫号: 927680

[交流] 【求助/交流】质粒跟目的基因连接不上怎么办

pMD 19与长片段cDNA连接，16度1h（或4度过夜），年前能连接上，现在连不上了，有人在做相关实验吗？能回答一下吗？
有人建议连接时间延长，可信吗？

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

pMD18-T载体与目的基因连接后构建的质粒能通过接合转移到一些难以转化的细菌中吗？已经有8人回复
构建pBI121表达载体，目的基因与载体连接不上已经有54人回复
酶切酶连转化已经有11人回复
求助：请问做TOPO克隆时总是连接不上怎么回事啊？已经有9人回复
将质粒上紧挨着的两个酶切位点进行双酶切后连接外源基因片段，是不是不好连接？已经有13人回复
质粒上的基因敲除与染色体上的基因敲除有什么区别吗？已经有8人回复
pGEM-T Easy载体的相关问题-讨论已经有7人回复
【求助/交流】表达载体构建不成功的原因已经有27人回复

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴

1楼 2011-03-10 19:21:58

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

AniterZhao

铁虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 8.5
帖子: 9
在线: 16.9小时
虫号: 1130362

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

如果是用高保真酶的话，可能不能用T4ligase连接，换用特异的连接酶
另外也建议长片段16℃连接过夜

赞一下(1人)

回复此楼

15楼2011-03-15 15:40:31

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

查看全部 18 个回答

zhengfan1109

银虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 1663.6
帖子: 602
在线: 309.3小时
虫号: 255973

★ ★
麦兜响当当(金币+10): thank you very much!实验条件和试剂材料都没有问题，除了室温年前年后这个可能不一样，can you give another explaination? your rapid answer will be highly appreciated! 2011-03-11 20:36:39
lstt09nk(金币+2): 鼓励 2011-03-12 15:33:39

引用回帖:

Originally posted by 麦兜响当当 at 2011-03-10 19:21:58:
pMD 19与长片段cDNA连接，16度1h（或4度过夜），年前能连接上，现在连不上了，有人在做相关实验吗？能回答一下吗？
有人建议连接时间延长，可信吗？

年前可以，年后不行，可能的原因太多了:
1) 你是否已经排除了所有试剂因素，包括连接酶，载体等等。比如其他人用这些酶或者载体成功过了吗？
2）你重复试验了吗？
3）感受态细胞是否存在问题？

这些都确定没问题了，再考虑其他问题。

赞一下(1人)

回复此楼

2楼2011-03-10 19:25:06

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖