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lorlarhuan

木虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】Westen blot问题请教 已有8人参与

请问各位前辈,大家在做westen blot时,跑胶之后转膜,大家都是用什么方法呢?是半干转还是湿转,条件是怎样确定的呢?转完之后是不是根据预染Marker来判断蛋白是否转过去了呢?我在转膜之后的滤纸上有看到比较清晰的预染Marker条带,是否意味着转过了呢?
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lorlarhuan

木虫 (初入文坛)

谢谢各位虫友的帮助,由于我们是用半干转的方法,转2块胶用86mA的电流,转大约45min的时候预染Marker基本上也已经转过去了,只有最大的2条带还有部分在胶上,这样的条件算是可以吗?谢谢!
8楼2011-03-07 16:38:00
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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
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最爱花诗雨(金币+2): 鼓励参与交流~~ 2011-03-07 18:35:32
我们一般是电转的,恩,转膜以后看Marker膜上有的话 就是转过去了。如果胶上还有Marker的话就是转膜不完全咯。
2楼2011-03-07 11:34:55
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★
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最爱花诗雨(金币+2): 鼓励参与 2011-03-07 18:36:29
滤纸上有marker?你不会电极插错方向了吧…………

我们用湿转
3楼2011-03-07 11:40:03
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lys0704

银虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
最爱花诗雨(金币+2): 谢谢分享经验~ 2011-03-07 18:37:02
我用的是半干转膜,条件是1.5或2mA每平方厘米30min,滤纸上有和目的蛋白大小相当的预染Marker,说明转膜转过了
服务大众
4楼2011-03-07 13:27:13
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