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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】Westen blot问题请教
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lorlarhuan

木虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】Westen blot问题请教 已有8人参与

请问各位前辈，大家在做westen blot时，跑胶之后转膜，大家都是用什么方法呢？是半干转还是湿转，条件是怎样确定的呢？转完之后是不是根据预染Marker来判断蛋白是否转过去了呢？我在转膜之后的滤纸上有看到比较清晰的预染Marker条带，是否意味着转过了呢？
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1楼 2011-03-07 10:21:43
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寒蕤

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by lorlarhuan at 2011-03-07 10:21:43:
请问各位前辈，大家在做westen blot时，跑胶之后转膜，大家都是用什么方法呢？是半干转还是湿转，条件是怎样确定的呢？转完之后是不是根据预染Marker来判断蛋白是否转过去了呢？我在转膜之后的滤纸上有看到比较清 ...

湿转，200mA,2h.以蛋白Marker转到膜上作为判断标准。
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7楼2011-03-07 15:09:04
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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
最爱花诗雨(金币+2): 鼓励参与交流~~ 2011-03-07 18:35:32
我们一般是电转的，恩，转膜以后看Marker膜上有的话 就是转过去了。如果胶上还有Marker的话就是转膜不完全咯。
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2楼2011-03-07 11:34:55
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
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最爱花诗雨(金币+2): 鼓励参与 2011-03-07 18:36:29
滤纸上有marker？你不会电极插错方向了吧…………

我们用湿转
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3楼2011-03-07 11:40:03
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lys0704

银虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
最爱花诗雨(金币+2): 谢谢分享经验~ 2011-03-07 18:37:02
我用的是半干转膜，条件是1.5或2mA每平方厘米30min，滤纸上有和目的蛋白大小相当的预染Marker，说明转膜转过了
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服务大众
4楼2011-03-07 13:27:13
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