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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教蛋白质纯化实验遇到的麻烦！！！急急
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王张扬33

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】请教蛋白质纯化实验遇到的麻烦！！！急急

各位大侠，我想问一下一般sds-page之后回收条带之后，用什么样的试剂盒纯化的效果好，我以前用的试剂盒条带溶解不好，而且回收效率不是很高。另一个问题是蛋白质纯化过程中，柱子的填料选择哪种材料针对包内酶含量较少纯化效果较好呢？现在过柱子之后跑电泳后会出现杂带。不知道生工有没有针对这些问题的产品，有劳大家介绍介绍！谢谢
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1楼 2011-03-05 18:58:23
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lisa68320

新虫 (初入文坛)
★ ★
翱宇(金币+2): Good，鼓励交流！ 2011-03-05 22:13:19
王张扬33(金币+1): 谢谢啊！ 2011-03-06 16:22:07
我们没有做过回收SDS-PAGE的蛋白，那样是不是量也太少了吧。不知道你后续还有做点什么实验呢？
关于你说纯化的问题，用什么柱材其实决定于你想要什么纯度的样品。我们一般先用亲和柱，得到比较纯的蛋白，但是这时一般还是有杂带的，下一步就用离子交换柱，最后用分子筛，一般这样纯化后的蛋白可以达到95%的纯度，所以你好好研究一下自己蛋白的性质，同时在蛋白提取的时候加入各种酶抑制剂，能保护蛋白不受降解。希望能帮到你哈
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3楼2011-03-05 20:41:58
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qjy_134

铜虫 (小有名气)
王张扬33(金币+1): 纯化之后想做的是蛋白n端测序，谢谢 2011-03-06 16:21:27
纯化过后你是用来做什么实验
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2楼2011-03-05 19:10:08
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xhjggl

木虫 (正式写手)
王张扬33(金币+2): 谢谢啊！我试试看看 2011-03-06 16:20:07
PAGE胶蛋白微量回收试剂盒     
Micro Protein PAGE Recovery Kit        
产品说明：十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）不仅可用于检测蛋白质的相对分子质量，而且也是分离纯化蛋白质的重要工具之一，随着蛋白质技术的微量化，有必要从凝胶中回收蛋白质以用于制备抗体、免疫印迹、氨基酸组分分析或末端序列测定等，本产品就是专门为此用途开发的微量蛋白胶回收法,本产品适用于从考染（SK3011），铜染（BSP017）或锌染（BSP019）中回收蛋白质，回收效率在50-80%,能够使用20次。Store: 2～8℃
产品特点:
1. 简单，不需要复杂而昂贵的仪器（如电洗脱仪）;
2. 适用于变性胶（SDS-PAGE）和非变性胶;
3. 回收率一般在50-80%之间（跟蛋白质大小，洗脱时间相关）;
4. 跟后续的实验兼容，包括2-D电泳、质谱测序等。
编号        包装        价格        产地
BSP062        20 preps        360        生工
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4楼2011-03-06 15:41:44
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