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水水726

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于蛋白降解 已有1人参与

最近做WB老做不出来,还出现杂带,怀疑蛋白降解了,我是放在-70的,实验室没有-80,请教各位,蛋白是不加loading放-70还是加了loading煮沸变性后放-20保存好?加了loading煮沸变性的话,温度是多少?煮多久?我是100度5分钟,这样可以么?还有变性后能再放-70么?怎么保存才能放久一点并且能防治降解???
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reasonspare

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 水水726 at 2011-01-12 00:37:15:
最近做WB老做不出来,还出现杂带,怀疑蛋白降解了,我是放在-70的,实验室没有-80,请教各位,蛋白是不加loading放-70还是加了loading煮沸变性后放-20保存好?加了loading煮沸变性的话,温度是多少?煮多久?我是 ...

加 不加 loading buffer,不要紧,关键是分装冻,用一次就不要再放回去了。通常变性是可以放回去的,但是不要超过1次。

建议
如果实在不放心是否讲解 走各SDS PAGE电泳,染色看看。有没有条带,然后再杂交。通常情况,同样样品跑两板胶,一板 考马斯兰或者银染,一板WB/,蛋白在胶里很稳定,如果前板条带不错,后面才作WD/
大慈大悲观世音救苦救难观世音有求必应观世音普渡众生观世音千手千眼观世音官大敢管观世音无处不在观世音普观普长观世音南无观世音菩萨
2楼2011-01-12 07:45:12
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