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冰鱼儿

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】真菌分子鉴定问题 已有7人参与

真菌分子鉴定里必须用到载体连接吗?急~~~
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★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1): 鼓励交流 2011-02-28 10:44:43
PCR完了之后跑电泳,看到有想要的产物产生,就将PCR产物送去测序。你们实验室没人做过?
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
9楼2011-02-27 16:13:39
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guozhibin

银虫 (小有名气)

应该不是吧,用真菌的rDNA通用引物ITS扩增出来后,直接测序就可以了。
2楼2011-02-25 21:04:04
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ottolzm

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
翱宇(金币+1): 鼓励交流 2011-02-25 21:33:47
用不用载体 取决于你的实验室 得到纯化后的真菌遗传指针信息 然后送交测序公司即可(但是像上海生工这样的公司 会要求你的DNA 的浓度为OD260/OD280到1.8至2.0 而且要你提供引物 如果是经典的比如18S等的 则不要 否则经常会测不出信号 如果实验室钱多 那就送到TaKaRa 日本人的服务很全面 而且质量可靠 但是价钱奇贵)   如果你们实验室做载体连接比较多 那就连个载体 再送出去测序 同样也要提供引物 但这样的话 可能会便宜一点 但是这样就将测序的一部分风险转嫁到你自己的因素上了 所以 这完全取决于你的选择了 祝你好运
3楼2011-02-25 21:15:21
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)

让一切随风飞翔

★ ★ ★
scelab(金币+3): 谢谢交流 2011-02-26 09:52:40
直接测序对回收DNA的要求比较高,有可能测不出来;
但是连接载体有可能连接上PCR过程中错配的;
综上,选择连接载体的,多送几个样,同时在PCR过程中选用高保真的酶
一直向前!
4楼2011-02-26 09:14:46
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