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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】真菌分子鉴定问题
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冰鱼儿

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】真菌分子鉴定问题 已有7人参与

真菌分子鉴定里必须用到载体连接吗？急~~~
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1楼 2011-02-25 17:14:45
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冼亮淀粉酶

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生物大分子降解酶
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lstt09nk(金币+1): 鼓励交流 2011-02-27 18:21:11
不用连接，让测序公司电泳回收，直接把PCR产物送测，省时省力省钱，四天后能得到结果。

这样的帖子这几天有三张，加上以前的就更多了，楼主发帖之前先站内搜索一下就明白了，省力得多。不过楼主是昨天才加入的新人，以后会学会这招的。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2011-02-26 12:59:41
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冼亮淀粉酶

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生物大分子降解酶
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rainwander(金币+2): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-02-27 16:24:35
不要紧，问吧。

因为PCR可能有非特异性扩增，造成除了目的条带之外还有干扰条带产生，他们都是用同一对引物扩增得来的，所以在测定序列的时候会在同一个碱基的位置上出现两个碱基反应同等强度，不知道正确的序列中应该是其中的哪一个，所以为了保证产物纯度，最保险的方法就是将PCR产物跑电泳，回收预计大小的条带。我以前是在有杂带时就会回收才送测，现在是写明目的条带在哪里，直接将PCR产物送测，让他们回收。花费是稍微多一点，但我的样品有二十几个，一个人回收要很久，公司人多，这样我得到结果就快得多。
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7楼2011-02-27 14:20:26
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冼亮淀粉酶

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生物大分子降解酶
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dhd997(金币+1): 鼓励交流 2011-02-28 10:44:43
PCR完了之后跑电泳，看到有想要的产物产生，就将PCR产物送去测序。你们实验室没人做过？
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9楼2011-02-27 16:13:39
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冼亮淀粉酶

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生物大分子降解酶
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lstt09nk(金币+3): 很详细，感谢淀粉酶~· 2011-02-28 14:09:59
这个我没想过，一直用TAE，因为我懒得配，就借别人的，别人刚好有的是TAE母液我就用TAE了。我不知道用TBE效果会怎样，但是用TAE是可以的。

PCR完了之后跑电泳，看到有想要的产物产生，就将PCR产物送去测序。意思是假如说一个PCR体系是一共25微升的，PCR完了之后就取2微升电泳，看到在大约600bp处有条带，就将剩下的23微升送去测序，测序单上写明PCR未纯化，表示让他们来纯化。可能23微升还达不到测序要求的量，那就做多几管得到大量，如果浓度不够高就真空蒸发提高浓度。
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13楼2011-02-28 14:00:04
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冼亮淀粉酶

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生物大分子降解酶
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缓冲液中的去离子水可以用蒸馏水代替，蒸馏水没多少离子的

上样缓冲液没有什么要求，按照说明书配置就行
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15楼2011-02-28 17:56:28
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