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【求助/交流】真菌分子鉴定问题 已有7人参与
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真菌分子鉴定里必须用到载体连接吗？急~~~ |
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5楼2011-02-26 12:59:41
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+2): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-02-27 16:24:35
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不要紧，问吧。 因为PCR可能有非特异性扩增，造成除了目的条带之外还有干扰条带产生，他们都是用同一对引物扩增得来的，所以在测定序列的时候会在同一个碱基的位置上出现两个碱基反应同等强度，不知道正确的序列中应该是其中的哪一个，所以为了保证产物纯度，最保险的方法就是将PCR产物跑电泳，回收预计大小的条带。我以前是在有杂带时就会回收才送测，现在是写明目的条带在哪里，直接将PCR产物送测，让他们回收。花费是稍微多一点，但我的样品有二十几个，一个人回收要很久，公司人多，这样我得到结果就快得多。 |
7楼2011-02-27 14:20:26
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9楼2011-02-27 16:13:39
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lstt09nk(金币+3): 很详细，感谢淀粉酶~· 2011-02-28 14:09:59
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这个我没想过，一直用TAE，因为我懒得配，就借别人的，别人刚好有的是TAE母液我就用TAE了。我不知道用TBE效果会怎样，但是用TAE是可以的。 PCR完了之后跑电泳，看到有想要的产物产生，就将PCR产物送去测序。意思是假如说一个PCR体系是一共25微升的，PCR完了之后就取2微升电泳，看到在大约600bp处有条带，就将剩下的23微升送去测序，测序单上写明PCR未纯化，表示让他们来纯化。可能23微升还达不到测序要求的量，那就做多几管得到大量，如果浓度不够高就真空蒸发提高浓度。 |
13楼2011-02-28 14:00:04
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15楼2011-02-28 17:56:28
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