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【求助/交流】真菌分子鉴定问题 已有7人参与
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真菌分子鉴定里必须用到载体连接吗？急~~~ |
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+2): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-02-27 16:24:35
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rainwander(金币+2): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-02-27 16:24:35
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不要紧，问吧。 因为PCR可能有非特异性扩增，造成除了目的条带之外还有干扰条带产生，他们都是用同一对引物扩增得来的，所以在测定序列的时候会在同一个碱基的位置上出现两个碱基反应同等强度，不知道正确的序列中应该是其中的哪一个，所以为了保证产物纯度，最保险的方法就是将PCR产物跑电泳，回收预计大小的条带。我以前是在有杂带时就会回收才送测，现在是写明目的条带在哪里，直接将PCR产物送测，让他们回收。花费是稍微多一点，但我的样品有二十几个，一个人回收要很久，公司人多，这样我得到结果就快得多。 |
7楼2011-02-27 14:20:26
2楼2011-02-25 21:04:04
ottolzm
木虫 (正式写手)
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
翱宇(金币+1): 鼓励交流 2011-02-25 21:33:47
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
翱宇(金币+1): 鼓励交流 2011-02-25 21:33:47
| 用不用载体 取决于你的实验室 得到纯化后的真菌遗传指针信息 然后送交测序公司即可(但是像上海生工这样的公司 会要求你的DNA 的浓度为OD260/OD280到1.8至2.0 而且要你提供引物 如果是经典的比如18S等的 则不要 否则经常会测不出信号 如果实验室钱多 那就送到TaKaRa 日本人的服务很全面 而且质量可靠 但是价钱奇贵) 如果你们实验室做载体连接比较多 那就连个载体 再送出去测序 同样也要提供引物 但这样的话 可能会便宜一点 但是这样就将测序的一部分风险转嫁到你自己的因素上了 所以 这完全取决于你的选择了 祝你好运 |
3楼2011-02-25 21:15:21
zhangxn2010
木虫 (著名写手)
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4楼2011-02-26 09:14:46
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