应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】提取基因组DNA后琼脂糖凝胶电泳显示拖尾
131/1返回列表
查看: 4505  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

laughitoff

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】提取基因组DNA后琼脂糖凝胶电泳显示拖尾

各位大虾，我提取基因组DNA活，跑琼脂糖凝胶电泳显示出拖尾现象，不知道是什么原因，怎么解决，药品我已经换过一批，但是结果还是一样！请各位帮助！我提的是沼气发酵过程中样品的DNA，用的是氯苯法！

[ Last edited by laughitoff on 2011-1-9 at 14:55 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-01-09 13:08:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangguoliguo

银虫 (小有名气)
★
rainwander(金币+1):鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-09 21:39:49
1、琼脂糖检测DNA一般去1~5微升原液，加2微升溴酚蓝便可，注意上样浓度；
2、可能是原液浓度太大造成的；
3、可能DNA已降解。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-01-09 16:41:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
★ ★
rainwander(金币+2):鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-09 21:40:49
引用回帖:
Originally posted by laughitoff at 2011-01-09 13:08:22:
各位大虾，我提取基因组DNA活，跑琼脂糖凝胶电泳显示出拖尾现象，不知道是什么原因，怎么解决，药品我已经换过一批，但是结果还是一样！请各位帮助！我提的是沼气发酵过程中样品的DNA，用的是氯苯法！

[ La ...

呵呵，拖尾的问题很可能是实验上的一些细节造成的。我提沼气发酵样品微生物宏基因组DNA的时候用的是周集中的那个经典CTAB法，跑0.8%的电泳看，23kb是单一条带。

注意整个过程中的枪尖是剪掉头部的，吸取上清等步骤要轻柔。注意到这些细节，提取出来的应该是23kb左右的单一条带。另外，可能需要多提几次练练手。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-01-09 16:47:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

在雨中

金虫 (著名写手)
也许有腐殖酸等杂质的污染呢？
赞一下 回复此楼
4楼2011-01-09 19:43:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yabing0324

金虫 (职业作家)
胶做的厚一点
回复此楼
5楼2011-01-09 19:51:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

laughitoff

新虫 (初入文坛)

回复

我取过的样品是加入Extration Buffer，在-20度保存的，提取前两天解冻的，但从第一次提取的时候就脱尾啦，但现在已经好几天了，会不会出现菌体自溶现象，造成有小的DNA片段，产生拖尾吗，而且我在提取之前我已经离心了！
赞一下 回复此楼
6楼2011-01-09 20:56:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

laughitoff

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 在雨中 at 2011-01-09 19:43:02:
也许有腐殖酸等杂质的污染呢？

有什么解决方法吗？
赞一下 回复此楼
7楼2011-01-09 20:57:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
引用回帖:
Originally posted by laughitoff at 2011-01-09 20:56:58:
我取过的样品是加入Extration Buffer，在-20度保存的，提取前两天解冻的，但从第一次提取的时候就脱尾啦，但现在已经好几天了，会不会出现菌体自溶现象，造成有小的DNA片段，产生拖尾吗，而且我在提取之前我已经离 ...

为什么是提取前两天解冻而不是临时解冻的呢？
赞一下 回复此楼
8楼2011-01-09 21:13:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

在雨中

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by laughitoff at 2011-01-09 20:57:42:


有什么解决方法吗？

在提取前对样品进行一定的脱腐处理呀。很简单。有一种TENP buffer，文献中查的到的。
赞一下 回复此楼
9楼2011-01-09 21:48:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

laughitoff

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-01-09 21:13:47:



为什么是提取前两天解冻而不是临时解冻的呢？

我样品比较多，本想解冻完直接提DNA的，但是实验室进仪器，收拾来着，没提上，我想知道，会有影响吗？
赞一下 回复此楼
10楼2011-01-09 22:20:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

laughitoff

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 在雨中 at 2011-01-09 21:48:20:


在提取前对样品进行一定的脱腐处理呀。很简单。有一种TENP buffer，文献中查的到的。

是在提取前先加入这种Buffer，溶解吗？我加入的是Extration Buffer，请问加这种TENP buffer混匀之后需要将TENP buffer离心，弃掉吗？
赞一下 回复此楼
11楼2011-01-09 22:25:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

在雨中

金虫 (著名写手)
★
rainwander(金币+1):鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-10 00:05:53
引用回帖:
Originally posted by laughitoff at 2011-01-09 22:25:11:


是在提取前先加入这种Buffer，溶解吗？我加入的是Extration Buffer，请问加这种TENP buffer混匀之后需要将TENP buffer离心，弃掉吗？

是的。将这种buffer和样品混合，震荡，然后离心去上清，重复洗涤2,3次就可以达到去除腐殖酸的目的。如果你的样品中腐殖酸很多，你会发现，弃去的上清很黑很黑的哦。

请参考文献：杨恋，杨朝晖，曾光明，等．2008．好氧堆肥高温期的嗜热真菌和嗜热放线菌群落结构 环境科学学报，28(12)：2514—2521
赞一下(1人) 回复此楼
12楼2011-01-09 22:43:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
★
rainwander(金币+1):鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-10 00:06:25
引用回帖:
Originally posted by laughitoff at 2011-01-09 22:20:38:

我样品比较多，本想解冻完直接提DNA的，但是实验室进仪器，收拾来着，没提上，我想知道，会有影响吗？

Of course!!!!!!!!!! 样品分成小份冻存，每次取出一只来提取DNA。看来你的样品十分不珍贵。
赞一下(1人) 回复此楼
13楼2011-01-09 22:49:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 laughitoff 的主题更新
131/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 303求调剂 +3 睿08 2026-03-17 3/150 2026-03-17 15:24 by 哦哦123
[考研] 一志愿天津大学化学工艺专业（081702）315分求调剂 +4 yangfz 2026-03-17 4/200 2026-03-17 15:00 by 我的船我的海
[考研] 293求调剂 +5 世界首富 2026-03-11 5/250 2026-03-17 10:16 by Sammy2
[考研] 267一志愿南京工业大学0817化工求调剂 +6 SUICHILD 2026-03-12 6/300 2026-03-17 09:24 by 雾散后相遇lc
[考研] 341求调剂 +5 捣蛋猪猪 2026-03-11 5/250 2026-03-17 06:56 by Muziwl
[考研] 材料专硕326求调剂 +5 墨煜姒莘 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:30 by 木瓜膏
[考研] 085601求调剂 +3 Du.11 2026-03-16 3/150 2026-03-16 20:42 by 无际的草原
[考研] 一志愿985，本科211，0817化学工程与技术319求调剂 +5 Liwangman 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:10 by 我的船我的海
[考研] 304求调剂 +4 ahbd 2026-03-14 4/200 2026-03-16 16:48 by 我的船我的海
[考研] 304求调剂 +3 曼殊2266 2026-03-14 3/150 2026-03-16 16:39 by houyaoxu
[考研] 328求调剂 +3 5201314Lsy！ 2026-03-13 6/300 2026-03-14 15:31 by hyswxzs
[考研] 297求调剂 +4 学海漂泊 2026-03-13 4/200 2026-03-14 11:51 by 热情沙漠
[考研] 279求调剂 +3 Dizzy123@ 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:02 by JourneyLucky
[考研] 281求调剂 +9 Koxui 2026-03-12 11/550 2026-03-13 20:50 by Koxui
[考研] 310求调剂 +3 【上上签】 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:16 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +7 18880831720 2026-03-11 7/350 2026-03-13 16:10 by JourneyLucky
[考研] 考研调剂 +4 芬达46 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:04 by ruiyingmiao
[考研] 求调剂 +3 程雨杭 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:06 by JourneyLucky
[考研] 283求调剂，材料、化工皆可 +8 苏打水7777 2026-03-11 10/500 2026-03-13 09:06 by Linda Hu
[考研] 333求调剂 +3 152697 2026-03-12 4/200 2026-03-13 07:08 by Iveryant
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭