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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于SOD活性测定中加甲硫氨酸的作用
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阿叉

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于SOD活性测定中加甲硫氨酸的作用

在用氮蓝四唑NBT法测定超氧化物歧化酶SOD活性下，加入130mmol/L甲硫氨酸(Met)溶液：称1.9399gMet用磷酸缓冲液定容至100mL
其目的是什么啊？
为什么要加甲硫氨酸了，看了半天都没发现个道道，还求大虫们赐教。

该试验中，甲硫氨酸是指L-甲硫氨酸还是指DL-甲硫氨酸，两者区别大吗？

[ Last edited by 阿叉 on 2011-3-31 at 12:41 ]
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1楼 2011-01-08 13:52:59
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starseacow

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dhd997(金币+3):good 2011-01-09 16:38:50
阿叉(金币+1): 2011-01-10 15:36:04
阿叉(金币+1): 2011-03-31 12:37:08
从该方法原理上可解释这个问题：
该方法依据超氧物歧化酶抑制氮蓝四唑（NBT）在光下的还原作用来确定酶活性大小。在氧气中，还原的核黄素与氧反应产生O2-，O2-将无色(或微黄)的氮蓝四唑还原为蓝色，SOD通过催化O2-歧化反应，生成O2与H2O2，从而抑制蓝色形成。于是光还原反应后，反应液蓝色愈深，说明酶活性愈低，反之酶活性愈高。
核黄素发生还原反应，需要体系中提供一定的电子供体，而甲硫氨酸就起到了这个电子供体作用，使得核黄素的光激发还原反应得以进行。
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2楼2011-01-09 15:49:33
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
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15楼: Originally posted by Miss木子 at 2014-09-12 14:26:29
那我还想问一下，EDTA-Na2具体有什么作用啊...

一般来说，在测定酶活性时加入EDTA是为了螯合一些重金属离子，避免影响酶活性
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16楼2014-09-12 16:26:33
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普通回帖

阿叉

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by starseacow at 2011-01-09 15:49:33:
从该方法原理上可解释这个问题：
该方法依据超氧物歧化酶抑制氮蓝四唑（NBT）在光下的还原作用来确定酶活性大小。在氧气中，还原的核黄素与氧反应产生O2-，O2-将无色(或微黄)的氮蓝四唑还原为蓝色，SOD通过催化O ...

懂了，那请问能不能说甲硫氨酸是还原剂？
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3楼2011-01-10 15:39:09
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
阿叉(金币+1): 2011-01-10 18:27:09
我觉得可以这么讲
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4楼2011-01-10 15:43:35
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阿叉

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by starseacow at 2011-01-10 15:43:35:
我觉得可以这么讲

呵呵 谢谢 起到这个电子供体作用  呵呵谢了啊
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5楼2011-01-10 18:28:18
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阿叉

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by starseacow at 2011-01-09 15:49:33:
从该方法原理上可解释这个问题：
该方法依据超氧物歧化酶抑制氮蓝四唑（NBT）在光下的还原作用来确定酶活性大小。在氧气中，还原的核黄素与氧反应产生O2-，O2-将无色(或微黄)的氮蓝四唑还原为蓝色，SOD通过催化O ...

这个甲硫氨酸有L-甲硫氨酸和DL-甲硫氨酸之分，请问我在SOD活性实验中用L,还是DL-甲硫氨酸？  之前没注意，卖药品的人说这两种试剂不一样。


还请大侠指导啊
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6楼2011-03-31 12:39:32
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
不清楚L与DL的区别是否影响实验。我在测定中使用的是L-甲硫氨酸
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7楼2011-03-31 13:39:46
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咸鱼

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 阿叉 at 2011-03-31 12:39:32:
这个甲硫氨酸有L-甲硫氨酸和DL-甲硫氨酸之分，请问我在SOD活性实验中用L,还是DL-甲硫氨酸？  之前没注意，卖药品的人说这两种试剂不一样。


还请大侠指导啊

我觉得L是左旋光性吧，DL就是左右旋光性抵消，无旋光性吧。大部分单糖，氨基酸都是有旋光性的。
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8楼2011-03-31 14:57:46
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Crescendo

铁杆木虫 (著名写手)
帖子真精彩!
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10楼2011-08-31 16:15:49
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紫凝蓝525419

金虫 (初入文坛)
好的
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11楼2012-03-13 13:52:37
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shoufangche

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5): 给个红包，谢谢回帖
我们用的是DL-Met！
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12楼2012-03-13 15:34:19
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蓝慧

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2011-01-09 15:49:33:
从该方法原理上可解释这个问题：
该方法依据超氧物歧化酶抑制氮蓝四唑（NBT）在光下的还原作用来确定酶活性大小。在氧气中，还原的核黄素与氧反应产生O2-，O2-将无色(或微黄)的氮蓝四唑还原为蓝色，SOD通过催化O ...

学到了！
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13楼2012-03-15 11:05:47
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451839845

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
送鲜花一朵
好贴，刚好要做这个实验，学习下
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14楼2012-08-01 15:18:20
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Miss木子

新虫 (初入文坛)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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2楼: Originally posted by starseacow at 2011-01-09 15:49:33
从该方法原理上可解释这个问题：
该方法依据超氧物歧化酶抑制氮蓝四唑（NBT）在光下的还原作用来确定酶活性大小。在氧气中，还原的核黄素与氧反应产生O2-，O2-将无色(或微黄)的氮蓝四唑还原为蓝色，SOD通过催化O2- ...

那我还想问一下，EDTA-Na2具体有什么作用啊
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15楼2014-09-12 14:26:29
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Miss木子

新虫 (初入文坛)
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16楼: Originally posted by starseacow at 2014-09-12 16:26:33
一般来说，在测定酶活性时加入EDTA是为了螯合一些重金属离子，避免影响酶活性...

在测SOD酶活性的时候所用试剂的浓度对结果影响大吗，我看到两个版本：
一是 14.5mM甲硫氨酸溶液； 3mM EDTA-Na2溶液l； 60μM核黄素溶液； 2.25mM 氮蓝四唑(NBT)溶液；
另一个是：130mmol/L甲硫氨酸（Met）溶液；100μmol/L EDTA-Na2溶液；20μmol/L核黄素溶液；750μmol/L 氮蓝四唑(NBT)溶液
这两种有什么区别呢，我实在是不知道用哪种浓度，求大神帮忙解决一下
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17楼2014-09-15 12:01:56
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starseacow

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17楼: Originally posted by Miss木子 at 2014-09-15 12:01:56
在测SOD酶活性的时候所用试剂的浓度对结果影响大吗，我看到两个版本：
一是 14.5mM甲硫氨酸溶液； 3mM EDTA-Na2溶液l； 60μM核黄素溶液； 2.25mM 氮蓝四唑(NBT)溶液；
另一个是：130mmol/L甲硫氨酸（Met）溶液； ...

我估计不同报道的实验配方差别不会太大，顶多会影响最佳显色范围。你所列出的浓度，第二个是不是搞错了，每个试剂都比经典方法浓度大了十倍。
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18楼2014-09-15 16:25:15
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Miss木子

新虫 (初入文坛)
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18楼: Originally posted by starseacow at 2014-09-15 16:25:15
我估计不同报道的实验配方差别不会太大，顶多会影响最佳显色范围。你所列出的浓度，第二个是不是搞错了，每个试剂都比经典方法浓度大了十倍。...

我列的第二种方法是李合生那本植物生理生化试验原理和技术这本书上的
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19楼2014-09-15 20:09:45
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starseacow

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19楼: Originally posted by Miss木子 at 2014-09-15 20:09:45
我列的第二种方法是李合生那本植物生理生化试验原理和技术这本书上的...

我不敢下定论书上一定是错的，但根据这个浓度比例，应该参考的是Constantine N. Giannopolitis and Stanley K. Ries在1977年发表的文章
Constantine N. Giannopolitis and Stanley K. Ries
Superoxide Dismutases
I. Occurrence in Higher Plants
Plant Physiology February 1977 vol. 59 no. 2 309-314
浓度只有书上这个配方的十分之一
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20楼2014-09-16 01:11:42
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Miss木子

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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20楼: Originally posted by starseacow at 2014-09-16 01:11:42
我不敢下定论书上一定是错的，但根据这个浓度比例，应该参考的是Constantine N. Giannopolitis and Stanley K. Ries在1977年发表的文章
Constantine N. Giannopolitis and Stanley K. Ries
Superoxide Dismutase ...

先谢谢了，有什么问题我再向你请教！
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21楼2014-09-16 20:19:22
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lmx75

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
扩大10倍是母液，比如说，三毫升的反应液，加入上述母液300微升，使得终浓度缩小了十倍，保证了反应液中正常的试剂浓度
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22楼2015-11-07 09:43:33
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lmx75

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
那是母液浓度，比如说三毫升反应体系中就加300微升各种10倍的母液试剂
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23楼2015-11-07 09:46:20
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阿叉9楼
2011-03-31 18:45   回复  
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Originally posted by starseacow at 2011-03-31 13:39:46: 不清楚L与DL的区别是否影响实验。我在测定中使用的是L-甲硫氨酸

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