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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于SOD活性测定中加甲硫氨酸的作用
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阿叉

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于SOD活性测定中加甲硫氨酸的作用

在用氮蓝四唑NBT法测定超氧化物歧化酶SOD活性下，加入130mmol/L甲硫氨酸(Met)溶液：称1.9399gMet用磷酸缓冲液定容至100mL
其目的是什么啊？
为什么要加甲硫氨酸了，看了半天都没发现个道道，还求大虫们赐教。

该试验中，甲硫氨酸是指L-甲硫氨酸还是指DL-甲硫氨酸，两者区别大吗？

[ Last edited by 阿叉 on 2011-3-31 at 12:41 ]
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1楼 2011-01-08 13:52:59
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
17楼: Originally posted by Miss木子 at 2014-09-15 12:01:56
在测SOD酶活性的时候所用试剂的浓度对结果影响大吗，我看到两个版本：
一是 14.5mM甲硫氨酸溶液； 3mM EDTA-Na2溶液l； 60μM核黄素溶液； 2.25mM 氮蓝四唑(NBT)溶液；
另一个是：130mmol/L甲硫氨酸（Met）溶液； ...

我估计不同报道的实验配方差别不会太大，顶多会影响最佳显色范围。你所列出的浓度，第二个是不是搞错了，每个试剂都比经典方法浓度大了十倍。
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18楼2014-09-15 16:25:15
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
★ ★ ★
dhd997(金币+3):good 2011-01-09 16:38:50
阿叉(金币+1): 2011-01-10 15:36:04
阿叉(金币+1): 2011-03-31 12:37:08
从该方法原理上可解释这个问题：
该方法依据超氧物歧化酶抑制氮蓝四唑（NBT）在光下的还原作用来确定酶活性大小。在氧气中，还原的核黄素与氧反应产生O2-，O2-将无色(或微黄)的氮蓝四唑还原为蓝色，SOD通过催化O2-歧化反应，生成O2与H2O2，从而抑制蓝色形成。于是光还原反应后，反应液蓝色愈深，说明酶活性愈低，反之酶活性愈高。
核黄素发生还原反应，需要体系中提供一定的电子供体，而甲硫氨酸就起到了这个电子供体作用，使得核黄素的光激发还原反应得以进行。
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2楼2011-01-09 15:49:33
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阿叉

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by starseacow at 2011-01-09 15:49:33:
从该方法原理上可解释这个问题：
该方法依据超氧物歧化酶抑制氮蓝四唑（NBT）在光下的还原作用来确定酶活性大小。在氧气中，还原的核黄素与氧反应产生O2-，O2-将无色(或微黄)的氮蓝四唑还原为蓝色，SOD通过催化O ...

懂了，那请问能不能说甲硫氨酸是还原剂？
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3楼2011-01-10 15:39:09
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
阿叉(金币+1): 2011-01-10 18:27:09
我觉得可以这么讲
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4楼2011-01-10 15:43:35
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阿叉9楼
2011-03-31 18:45   回复  
引用回帖:
Originally posted by starseacow at 2011-03-31 13:39:46: 不清楚L与DL的区别是否影响实验。我在测定中使用的是L-甲硫氨酸

哦
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