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asdfghjkl-00

新虫 (初入文坛)


[交流] 【求助/交流】P不出正确条带

我设计的引物是900的,但是在750出来了一个,500出来了一个,我P 了好几次,否没有得到正确条带,请问是怎么回事啊?是反映条件的问题还是引物问题?如果是反映条件的问题,该如何改进?如果是引物的问题,有没有什么办法可以验证引物的正确性啊?
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qujinyan123

金虫 (初入文坛)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我的引物序列是从文献上看的,我想知道如何判断它是否合理。请教一下,该怎么进行同源性检查?谢谢!
   你可以先从美国NCBI网站去查找一下原始序列,看相关原始序列能否找到,是否正确,我曾碰到这样的情况,从一篇文献中的序列按相关原则反向推出的序列比对原始序列,中间少一个碱基,其余各项情况符合,这个肯定无法PCR出来,问过老师,为什么会出现这种情况,老师说,有些人为保护所谓的隐私权之类的,会故意更改或增减相关碱基,导致按照文献根本无法做出来。所以按照文献操作要慎重,最好自己设计。我课题的几个引物全是自己设计的,比我从文献上找的,效果都要好。
    同源性检查也是在NCBI网站中去做,讲起来比较麻烦,你可以咨询分子生物学相关专业的师兄、师姐或老师,让他们具体教一下你。
   设计引物主要涉及到引物长度,产物长度,退火温度,是否会形成发卡结、二聚体之类的。
17楼2011-01-10 08:32:03
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dhd997(金币+1):鼓励交流 2011-01-08 14:49:41
你的问题的确很多,可以看看版内的引物设计专题,另外看看自己的引物设计的是否合适;再看看反应的体系,可以改变反应体系!
2楼2011-01-08 14:45:10
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pxhcooh

金虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
asdfghjkl-00(金币+1): 2011-01-09 09:21:46
你把你的引物设计信息给大家看看 或许会有答案
3楼2011-01-08 14:49:09
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zx1984

木虫 (正式写手)



rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~ 2011-01-08 16:02:52
引物、模板、时间、温度,好好查查
4楼2011-01-08 15:18:06
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