24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 869  |  回复: 3

ideal9268

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于real time PCR 的问题! 已有2人参与

用ABI 7000做real time PCR,TAKARA(SYBR)的试剂。结果内参没溶解曲线和扩增曲线,倒是另外的一个基因扩增正常。跑电泳有条带,与预计大小相同(绝对不是引物二聚体)。之前试过这些引物,都能扩出来的。如果说是模板的问题,为什么有的基因就扩出来的?有没有高手知道这是怎么回事啊?万分感谢!

祝大家元旦快乐!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

翱宇

禁虫 (正式写手)

将军

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+3):谢谢交流 2011-01-02 13:18:13
你引物的问题吧,或者建议换一个内参基因。我曾做的实验,引物退火温度很高,Tm值在70左右,真正选择63度退火。两个引物之间的条带大小为200bp左右,一般溶解曲线等都很好!
内参的引物是不好选择的,保守性高,建议多设计几对引物,选择效果好的使用。而且最好RNA消化基因组DNA,然后再次抽提,选取2ugRNA作逆转录,将cDNA稀释40倍,使用!
建议做四个技术重复。
2楼2011-01-01 21:54:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ideal9268

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 翱宇 at 2011-01-01 21:54:08:
你引物的问题吧,或者建议换一个内参基因。我曾做的实验,引物退火温度很高,Tm值在70左右,真正选择63度退火。两个引物之间的条带大小为200bp左右,一般溶解曲线等都很好!
内参的引物是不好选择的,保守性高, ...

这个内参的引物前几天刚用过,没问题,效果还很好。这次PCR的条件也和上次完全一样。
还是谢谢你!
3楼2011-01-01 21:58:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ideal9268

铜虫 (小有名气)

没有人知道吗?必须解决这个问题啊!期待中······
4楼2011-01-02 17:29:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ideal9268 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料与化工300求调剂 +25 肖开文 2026-04-09 26/1300 2026-04-10 05:24 by chenzhimin
[考研] 288求调剂,一志愿华南理工大学071005 +16 ioodiiij 2026-04-08 16/800 2026-04-09 23:08 by wolf97
[考研] 一志愿中南大学物理学,英一66,求调剂 +3 长烟旖旎 2026-04-08 4/200 2026-04-09 21:27 by wutongshun
[考研] 267求调剂 +5 再忙也要吃饭啊 2026-04-09 5/250 2026-04-09 18:47 by stone_128
[考研] 电子信息270求调剂 +11 terminal469 2026-04-07 11/550 2026-04-09 18:28 by hy861222
[考研] 296求调剂 +5 汪!?! 2026-04-09 5/250 2026-04-09 17:47 by 柠檬不酸zy
[考研] 337求调剂 +4 Gky09300550, 2026-04-09 4/200 2026-04-09 17:18 by 帕尔马拉特
[考研] 化学308分求调剂 +21 你好明天你好 2026-04-07 23/1150 2026-04-08 22:32 by 凯凯要变帅
[考研] 259求调剂 +5 就爱吃土豆呀呀 2026-04-07 5/250 2026-04-07 22:40 by JourneyLucky
[考研] 071000生物学,一志愿深圳大学296分,求调剂 +12 TIckLw 2026-04-06 13/650 2026-04-07 20:34 by lijunpoly
[考研] 277工科求调剂 +10 1915668 2026-04-04 11/550 2026-04-06 23:53 by 心媛意北
[考研] 327考研调剂推荐 +6 呜呜呜呜呢 2026-04-06 6/300 2026-04-06 21:39 by 啵啵啵0119
[考研] 材料工程310专硕调剂 +14 捞捞我…. 2026-04-04 15/750 2026-04-06 14:18 by lqwchd
[考研] 319求调剂 +3 handrui 2026-04-05 3/150 2026-04-06 09:33 by jp9609
[考研] 材料专硕(0856) 339分求调剂 +10 哈哈哈鹅哈哈哈 2026-04-04 10/500 2026-04-05 18:51 by 蓝云思雨
[考研] 085600调剂 +9 东照照照 2026-04-04 9/450 2026-04-05 13:44 by ujn_zhuj
[考研] 085602调剂 初试总分335 +12 19123253302 2026-04-04 12/600 2026-04-05 08:08 by 544594351
[考研] 材料与化工306分找调剂 +12 沧海轻舟e 2026-04-03 13/650 2026-04-04 23:45 by lqwchd
[考研] 305求调剂 +3 77Qi 2026-04-03 3/150 2026-04-03 23:01 by qzxyhcsy
[考研] 313求调剂 +3 ~微微凉~ 2026-04-03 3/150 2026-04-03 11:25 by 啵啵啵0119
信息提示
请填处理意见