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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助 关于酿酒酵母摇菌问题
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sunqx

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】求助 关于酿酒酵母摇菌问题

各位养过酿酒酵母的前辈。
最近我再酿酒酵母中，诱导表达一个蛋白。
在培养基中摇菌的时候， 发现取单克隆，28度摇菌，一晚上甚至两天都没有发现有浑浊的菌液产生。需要的氨基酸及糖都加了，至今不知道什么原因。 有了解的 留下几句给指点一下
谢谢了。
另外，大家摇菌的时候一般加多少菌体接种？
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1楼 2010-12-30 11:48:55
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sunqx

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by iaminxanadu at 2010-12-30 14:12:56:
1.你要表达的蛋白对酿酒酵母有无毒副作用？
2.培养基的选取？
3.其他阳性克隆也出现这种状况？

没有毒副作用呢，
培养基不含URACIL
其他阳性克隆也是这样的情况呢。
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5楼2010-12-30 21:22:20
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)
★
rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~ 2010-12-30 14:42:53
挑单克隆，YPD培养液摇过夜，OD大概是3左右，没问题的，做酵母感受态就是这么做的。
你是用的诱导培养基SRG？

我最近也刚开始做酵母方面的，多交流。
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2楼2010-12-30 13:06:22
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iaminxanadu

木虫 (正式写手)
1.你要表达的蛋白对酿酒酵母有无毒副作用？
2.培养基的选取？
3.其他阳性克隆也出现这种状况？
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3楼2010-12-30 14:12:56
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sunqx

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by gongeleven at 2010-12-30 13:06:22:
挑单克隆，YPD培养液摇过夜，OD大概是3左右，没问题的，做酵母感受态就是这么做的。
你是用的诱导培养基SRG？

我最近也刚开始做酵母方面的，多交流。

我用的是不含尿嘧啶的 合成培养基。
因此不能用 YPD。
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4楼2010-12-30 21:21:32
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