24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

花开靡霏

金虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 744.6
帖子: 71
在线: 10小时
虫号: 798899

[交流] 【求助/交流】如何让一个蛋白在原核细胞中表达

目前在做的一个蛋白，分子量比较大，在70KD以上，希望在E.Coli BL21中表达。质粒构建、转化都没有问题，但是电泳看不到表达。请教有经验的给支个招，看怎么办。

回复此楼

» 猜你喜欢

为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种? 已经有5人回复
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》已经有3人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有214人回复
求助食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社电子版已经有5人回复
胶体几丁质的结晶度？已经有0人回复
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士已经有2人回复
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线已经有5人回复

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:
查看全部散金贴

1楼2010-12-27 16:53:41

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

paulajjh

木虫 (著名写手)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 2157.6
帖子: 1073
在线: 89.4小时
虫号: 552104

★
花开靡霏(金币+2):谢谢参与

我的蛋白也没表达，期待有更多的人帮助你。

赞一下(1人)

回复此楼

3楼2010-12-27 17:54:17

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

查看全部 4 个回答

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

★ ★ ★
花开靡霏(金币+2):谢谢参与
rainwander(金币+2):鼓励积极参与~~~ 2010-12-27 21:52:13

我的蛋白大约56kDa，在大肠里面表达量还不错。有这样的说法是：100kDa以上的蛋白在大肠中不好表达。不知道70kDa怎么样。不过，我个人认为表达应该不是问题。

我觉得你可以先换宿主试试，因为不同的宿主密码子偏好性不同，也许你的序列有稀有密码子，在这个株系里表达不是很好。最简单的办法就是换宿主，多找几种宿主细胞转化诱导。

如果这个途径还不行的话，就要考虑换载体了，这个相对于换宿主还是麻烦了些。

最后，我不清楚你这是不是第一次做表达？诱导温度，诱导时间，诱导剂的浓度这些条件都优化过么？如果没有的话，这个应该是你最先考虑的问题。

赞一下(2人)

回复此楼

2楼2010-12-27 17:19:29

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖