24小时热门版块排行榜    

查看: 1106  |  回复: 3
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

花开靡霏

金虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】如何让一个蛋白在原核细胞中表达

目前在做的一个蛋白,分子量比较大,在70KD以上,希望在E.Coli BL21中表达。质粒构建、转化都没有问题,但是电泳看不到表达。请教有经验的给支个招,看怎么办。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
★ ★
花开靡霏(金币+2):谢谢参与
rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~ 2010-12-27 21:52:22
先看看ORF是否正确。
4楼2010-12-27 21:01:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答
★ ★ ★
花开靡霏(金币+2):谢谢参与
rainwander(金币+2):鼓励积极参与~~~ 2010-12-27 21:52:13
我的蛋白大约56kDa,在大肠里面表达量还不错。有这样的说法是:100kDa以上的蛋白在大肠中不好表达。不知道70kDa怎么样。不过,我个人认为表达应该不是问题。

我觉得你可以先换宿主试试,因为不同的宿主密码子偏好性不同,也许你的序列有稀有密码子,在这个株系里表达不是很好。最简单的办法就是换宿主,多找几种宿主细胞转化诱导。

如果这个途径还不行的话,就要考虑换载体了,这个相对于换宿主还是麻烦了些。

最后,我不清楚你这是不是第一次做表达? 诱导温度,诱导时间,诱导剂的浓度这些条件都优化过么?如果没有的话,这个应该是你最先考虑的问题。
2楼2010-12-27 17:19:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

paulajjh

木虫 (著名写手)



花开靡霏(金币+2):谢谢参与
我的蛋白也没表达,期待有更多的人帮助你。
3楼2010-12-27 17:54:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-14 22:32 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +23 医学老男孩 2026-08-13 49/2450 2026-08-14 20:02 by zhaifei
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +5 Ldrop2023 2026-08-13 5/250 2026-08-14 18:48 by ssxclkj
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[基金申请] 好奇怪的filecode +6 布布和一二 2026-08-08 7/350 2026-08-14 13:38 by Equinoxhua
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +5 工厂打螺丝 2026-08-08 5/250 2026-08-14 11:03 by 玖戈弋
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +10 Tide man 2026-08-10 11/550 2026-08-14 10:30 by 沁言学术
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
信息提示
请填处理意见