应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】双酶切切不动
51/1返回列表
查看: 2777  |  回复: 21
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

ikaren2013

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】双酶切切不动

我分别用TOYOBO和Fermentas的限制性内切酶做酶切反应，都切不开，是怎么回事啊？
ps:这个质粒是个重组体，我现在需要把上面的目的片段切下来，目的片段的大小约为670bp
我的对照设置得不好，缺少重组质粒不酶切的对照。以至于让虫友误认为我想得到pcDNA3.0上的片段了。实际上，我想得到的重组体上的目的基因片段。大概670bp。


质粒浓度    205ug/ml      OD260/280=1.90

TOYOBO
体系                             10ul
DNA(0.2ug/ul)               4ul
水                                  4ul
Buffer(10*)                    1ul
BamH I                        0.5ul
Xho I                           0.5ul
_____________________
37℃  6个小时

Fermentas
体系                              10ul
DNA(0.2ug/ul)                4ul
水                                   2.5ul
Tango  Buffer(10*)         2ul      (工作浓度为2*）
BamH I                           1ul     （要求Bam H I 为2倍）
Xho I                           0.5ul
_____________________
37℃  3个小时

以下是酶切结果图片
TOYOBO:
Fermentas:

[ Last edited by ikaren2013 on 2010-12-27 at 21:19 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2010-12-27 00:22:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liminsun_0

金虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
ikaren2013(金币+1):谢谢参与
scelab(金币+3):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-12-27 23:25:38
要想酶切尽量完全一点，就要DNA量少一点，酶多一点，条件应该没问题，还要检查试剂的问题，切不动的时候同时做个单酶切和双酶切相同条件的对比实验看看结果再分析问题出在哪里。另外，问一下虫友们，酶切DNA都是提取克隆的质粒进行酶切的吗？有没有用直接菌落PCR产物做酶切的？
赞一下(2人) 回复此楼
16楼2010-12-27 15:54:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 22 个回答

junior850621

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
ikaren2013(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-12-27 08:42:04
ikaren2013(金币+1):谢谢！ 2010-12-27 21:19:22
质粒DNA减少到1μL试一下。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-12-27 01:08:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangy0908

金虫 (正式写手)
★ ★
ikaren2013(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-12-27 08:42:17
减少你的DNA用量，增加酶用量的！以及你要注意酶的活性是否正常的？
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2010-12-27 07:00:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rioarsenal

金虫 (正式写手)
★ ★
ikaren2013(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-12-27 08:42:28
先分别做个单酶切试试，看能切开不
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2010-12-27 08:05:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 22 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭