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njauzx

金虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】菌体煮沸后蛋白变性了吗?

表达蛋白,收取200微升菌体,SDS,巯基乙醇缓冲液,煮沸10分钟,离心上样。此时的蛋白变性了吗?
如果变性了会不会沉淀?会不会在离心的时候离下去了?
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rioarsenal

金虫 (正式写手)


★ ★ ★
njauzx(金币+1):谢谢参与
scelab(金币+2):热心虫友,欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-12-24 23:17:42
引用回帖:
Originally posted by njauzx at 2010-12-24 15:41:20:
表达蛋白,收取200微升菌体,SDS,巯基乙醇缓冲液,煮沸10分钟,离心上样。此时的蛋白变性了吗?
如果变性了会不会沉淀?会不会在离心的时候离下去了?

又是SDS,又是巯基乙醇,还煮沸,你说能不变性么?

加了SDS,都带电荷了,相互排斥,当然不会沉淀,变性电泳都这么跑。
4楼2010-12-24 16:02:41
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★ ★ ★
njauzx(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+2):对,是这样,鼓励~~~ 2010-12-24 16:05:07
肯定是变性了,但是会溶在上样缓冲液里面,不会沉淀。
2楼2010-12-24 15:47:38
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njauzx

金虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2010-12-24 15:47:38:
肯定是变性了,但是会溶在上样缓冲液里面,不会沉淀。

就是想问这个!为什么溶在里面不会沉淀呢?是哪个组分的作用?
3楼2010-12-24 15:48:27
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★ ★
njauzx(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-12-25 09:03:34
变性不一定沉淀的,加SDS后都带电荷了,互相排斥的。
5楼2010-12-24 22:56:44
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