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谢开龙

金虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】关于菌体收集的问题

小弟最近在做BT菌基因的筛选,利用水煮的办法粗提DNA,但是发现水煮后一部分菌株离心不下去,特请教一下原因?
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谢开龙(金币+1):谢谢参与
抢个沙发,等高人出现
2楼2011-04-11 22:16:16
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谢开龙(金币+1):谢谢参与
为什么煮沸?
3楼2011-04-11 22:23:34
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谢开龙(金币+1):谢谢参与
以前提过,70-80度之间的,现在都忘记了
4楼2011-04-12 20:02:29
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郝钊

金虫 (小有名气)


★ ★
谢开龙(金币+1):谢谢参与
wolfebst(金币+1): 感谢回答 2011-04-14 16:41:55
你说的菌株长得什么样子?什么颜色?你的转速多高?个人认为你的离心力不够大,煮沸后的变性蛋白没有被离下去。
5楼2011-04-12 21:59:08
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谢开龙

金虫 (小有名气)


哦,我没说清楚,这个办法适用于提取质粒DNA,煮沸可以破解细胞壁,并使蛋白和核DNA变性,而质粒DNA因为其互相缠绕的拓扑结构而不会变性。
6楼2011-04-13 20:05:01
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zemin_fang

木虫 (正式写手)



谢开龙(金币+1):谢谢参与
为什么要煮沸?SDS裂解法不是很好吗?
7楼2011-04-13 20:55:33
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asd564244481

铜虫 (小有名气)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 谢开龙 at 2011-04-11 21:39:26:
小弟最近在做BT菌基因的筛选,利用水煮的办法粗提DNA,但是发现水煮后一部分菌株离心不下去,特请教一下原因?

我不知道你这个问题是不是偶然的,我之前用冻融法破碎细胞就遇到了这种问题,我先冷冻然后用沸水加热破碎细胞,结果在离心的时候,离心管中的菌体就分为上下两层,在离心管中的液面上方也有一层菌体没有被离心到离心管的底部。求牛人解答。
8楼2011-04-15 08:55:40
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松虱

金虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
如果对后续的实验没有影响就没事了撒 但是如果影响很大的话 就建议还是用试剂盒 或者配置溶剂进行提取
9楼2011-04-15 11:43:54
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