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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 【求助/交流】关于菌体收集的问题
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谢开龙

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于菌体收集的问题

小弟最近在做BT菌基因的筛选，利用水煮的办法粗提DNA，但是发现水煮后一部分菌株离心不下去，特请教一下原因？
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1楼2011-04-11 21:39:26
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
★
谢开龙(金币+1):谢谢参与
抢个沙发，等高人出现
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2楼2011-04-11 22:16:16
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wolfebst

至尊木虫 (职业作家)
★
谢开龙(金币+1):谢谢参与
为什么煮沸？
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3楼2011-04-11 22:23:34
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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)
★
谢开龙(金币+1):谢谢参与
以前提过，70-80度之间的，现在都忘记了
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4楼2011-04-12 20:02:29
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郝钊

金虫 (小有名气)
★ ★
谢开龙(金币+1):谢谢参与
wolfebst(金币+1): 感谢回答 2011-04-14 16:41:55
你说的菌株长得什么样子？什么颜色？你的转速多高？个人认为你的离心力不够大，煮沸后的变性蛋白没有被离下去。
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5楼2011-04-12 21:59:08
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谢开龙

金虫 (小有名气)
哦，我没说清楚，这个办法适用于提取质粒DNA，煮沸可以破解细胞壁，并使蛋白和核DNA变性，而质粒DNA因为其互相缠绕的拓扑结构而不会变性。
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6楼2011-04-13 20:05:01
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zemin_fang

木虫 (正式写手)
★
谢开龙(金币+1):谢谢参与
为什么要煮沸？SDS裂解法不是很好吗？
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7楼2011-04-13 20:55:33
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asd564244481

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 谢开龙 at 2011-04-11 21:39:26:
小弟最近在做BT菌基因的筛选，利用水煮的办法粗提DNA，但是发现水煮后一部分菌株离心不下去，特请教一下原因？

我不知道你这个问题是不是偶然的，我之前用冻融法破碎细胞就遇到了这种问题，我先冷冻然后用沸水加热破碎细胞，结果在离心的时候，离心管中的菌体就分为上下两层，在离心管中的液面上方也有一层菌体没有被离心到离心管的底部。求牛人解答。
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8楼2011-04-15 08:55:40
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松虱

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
如果对后续的实验没有影响就没事了撒 但是如果影响很大的话 就建议还是用试剂盒 或者配置溶剂进行提取
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9楼2011-04-15 11:43:54
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