应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】荧光定量PCR
51/1返回列表
查看: 1170  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

lij2

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】荧光定量PCR

引物设计时是55-56℃，合成出来是54℃了，探针温度比引物高。合成片段85bp。请教高手，退火温度从多少开始设置比较好？这么短的片段，是不是可以2步法进行？热链怎样设计比较好？谢谢~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-12-22 19:15:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

love_st

金虫 (著名写手)
lij2(金币+1): 2010-12-24 19:26:10
引用回帖:
Originally posted by lij2 at 2010-12-22 19:15:37:
引物设计时是55-56℃，合成出来是54℃了，探针温度比引物高。合成片段85bp。请教高手，退火温度从多少开始设置比较好？这么短的片段，是不是可以2步法进行？热链怎样设计比较好？谢谢~

探针温度是多少，没关系的，退火可以先低点，55度吧，热链是什么？
赞一下 回复此楼
3楼2010-12-23 13:04:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

yingnj

新虫 (初入文坛)
lij2(金币+1): 2010-12-24 19:26:22
合成片断短的话用2步法吧，可以设置成55或者56度。
热链是什么，不解~
赞一下 回复此楼
4楼2010-12-23 13:47:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

poog502

木虫 (正式写手)
lij2(金币+1):普通PCR出来了，想请教2步法 2010-12-24 19:29:18
先做预备试验，和普通PCR一样的，可以少跑几个循环比如20，跑个电泳看看结果如何。总之，出得来才是硬道理。
赞一下 回复此楼
6楼2010-12-23 13:53:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lij2

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yingnj at 2010-12-23 13:47:28:
合成片断短的话用2步法吧，可以设置成55或者56度。
热链是什么，不解~

试了下退火60°都可以出来，两步法的话，85bp时间多少比较合适呢？是不是变性95° 5s就够了？看到文献上有用5s变性的
赞一下 回复此楼
7楼2010-12-24 19:28:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭