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pingdiguo

金虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】细胞培养中漂浮物问题已有4人参与

我在培养细胞的时候，96孔板中细胞总是能贴壁生长良好。
当转移到24孔板中，细胞都集中在中间生长，中间感觉细胞都层叠起来了，有一部分飘起来了，而边上还没长满，不知道是怎么回事？
移到6孔板就更奇怪了，有一圈细胞呈环状生长，其他部分没什么细胞。

我想知道，同样的细胞在不同板中生长不均的状况是因为我接种的时候没有吹匀还是板子本身所致?
漂浮起来的那一层是缺少贴壁平面，还是污染或死亡的细胞？
是不是每次转移细胞都需要做饲养细胞？如果细胞接种量不够会造成什么影响？
求高手指点！

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You never know how strong you really are, until being strong is the only choice you have.

1楼2010-12-22 15:44:26

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xiaoee2728

金虫 (小有名气)

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★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+3):good 2011-01-02 13:15:39

应该是没有摇匀吧，24孔板由于孔板本身的原因，不太容易摇匀，就算是勉强用移液器吹匀后，由于孔内的环流，静止以后细胞还是会聚集在中间，边上的细胞很少。
可以在铺板后左右前后多摇几次，然后上下震一下，或者稍微倾斜孔板，摇匀以后放平，之后就静置直到细胞贴壁，切记不要晃动孔板，以免再产生环流。
6孔板就容易多了，可以直接用移液器吹匀，或者8字摇匀都可以使细胞分布均匀。
最终细胞环状生长可能是孔板表面不好导致细胞不贴壁。检查一下孔板，如果已用多次，板的表面已经斑驳有很多划痕了，建议换新的孔板试一下。