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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 【求助/交流】细胞培养中漂浮物问题
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pingdiguo

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】细胞培养中漂浮物问题已有4人参与

我在培养细胞的时候，96孔板中细胞总是能贴壁生长良好。
当转移到24孔板中，细胞都集中在中间生长，中间感觉细胞都层叠起来了，有一部分飘起来了，而边上还没长满，不知道是怎么回事？
移到6孔板就更奇怪了，有一圈细胞呈环状生长，其他部分没什么细胞。

我想知道，同样的细胞在不同板中生长不均的状况是因为我接种的时候没有吹匀还是板子本身所致?
漂浮起来的那一层是缺少贴壁平面，还是污染或死亡的细胞？
是不是每次转移细胞都需要做饲养细胞？如果细胞接种量不够会造成什么影响？
求高手指点！
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1楼2010-12-22 15:44:26
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
没有种匀，然后挤死了
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2楼2010-12-22 15:45:23
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★
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amisking(金币+2):鼓励发帖交流！ 2010-12-22 19:27:55
amisking(金币+1):good！ 2010-12-22 19:28:11
培养板的质量不好是会导致这种情况的
当然你也得看看是不是个人原因

饲养细胞？what？

有些细胞种太稀会死，有些无视~大部分肿瘤细胞都不惧~
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3楼2010-12-22 15:46:29
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pingdiguo

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-22 15:46:29:
培养板的质量不好是会导致这种情况的
当然你也得看看是不是个人原因

饲养细胞？what？

有些细胞种太稀会死，有些无视~大部分肿瘤细胞都不惧~

现在看来真是污染了，细胞一个个都死了，只有一两板好些，试图抢救细胞，有什么好办法么？
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4楼2010-12-30 12:49:16
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yanliusu

新虫 (小有名气)
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dhd997(金币+3):good 2011-01-02 13:15:17
跟培养板没关系，这绝对是接种的时候没摇匀。24孔板摇不匀很容易长在中间，长老了最上面的细胞被挤在培养基中漂浮了。
摇板子的时候不要转圈摇，前后用力摇3次，左右用力摇3次就可以了，细胞沉淀之前不要拿着板子到处走到处看。
至于6孔板，肉眼都可以看到细胞在底部是否均匀的。
24孔板其实不用摇，接种的时候就很匀，直接静置待细胞沉底了再拿去培养箱里就好了，6孔板必须摇。
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5楼2010-12-30 14:42:42
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
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Originally posted by pingdiguo at 2010-12-30 12:49:16:


现在看来真是污染了，细胞一个个都死了，只有一两板好些，试图抢救细胞，有什么好办法么？

污染了什么东西？
不过会影响细胞状态而且还是慢慢来的，估计是支原体了
如果是支原体，果断仍了细胞吧，不用救了，重新复苏或者买新的
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6楼2010-12-30 17:14:57
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xiaoee2728

金虫 (小有名气)
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dhd997(金币+3):good 2011-01-02 13:15:39
应该是没有摇匀吧，24孔板由于孔板本身的原因，不太容易摇匀，就算是勉强用移液器吹匀后，由于孔内的环流，静止以后细胞还是会聚集在中间，边上的细胞很少。
可以在铺板后左右前后多摇几次，然后上下震一下，或者稍微倾斜孔板，摇匀以后放平，之后就静置直到细胞贴壁，切记不要晃动孔板，以免再产生环流。
6孔板就容易多了，可以直接用移液器吹匀，或者8字摇匀都可以使细胞分布均匀。
最终细胞环状生长可能是孔板表面不好导致细胞不贴壁。检查一下孔板，如果已用多次，板的表面已经斑驳有很多划痕了，建议换新的孔板试一下。
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似水流年
7楼2010-12-30 17:30:31
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pingdiguo

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yanliusu at 2010-12-30 14:42:42:
跟培养板没关系，这绝对是接种的时候没摇匀。24孔板摇不匀很容易长在中间，长老了最上面的细胞被挤在培养基中漂浮了。
摇板子的时候不要转圈摇，前后用力摇3次，左右用力摇3次就可以了，细胞沉淀之前不要拿着板子 ...

原来需要摇啊。。。学到了。。。谢谢。。。
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8楼2011-01-02 08:53:18
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pingdiguo

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-30 17:14:57:


污染了什么东西？
不过会影响细胞状态而且还是慢慢来的，估计是支原体了
如果是支原体，果断仍了细胞吧，不用救了，重新复苏或者买新的

怎么判断是污染了细菌还是支原体呢？现在增加了抗生素抢救呢。。。
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9楼2011-01-02 08:55:02
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pingdiguo

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by xiaoee2728 at 2010-12-30 17:30:31:
应该是没有摇匀吧，24孔板由于孔板本身的原因，不太容易摇匀，就算是勉强用移液器吹匀后，由于孔内的环流，静止以后细胞还是会聚集在中间，边上的细胞很少。
可以在铺板后左右前后多摇几次，然后上下震一下，或者 ...

嗯，学到了，谢谢！
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10楼2011-01-02 08:56:18
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