应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】BL21(DE3) 在M9中发生自溶
51/1返回列表
查看: 1640  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

jqq1985

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】BL21(DE3) 在M9中发生自溶

最近在做蛋白的标记，用的是BL21（DE3），开始用4mlLB摇菌摇浓，然后转1ml到70mlM9中扩大，最后转入700 ML M9中再放大并诱导表达。做的过程中发现，细菌在LB中生长稳定，转入小体积M9中和大体积M9中会发生自溶现象！有时候在70ml中自溶，有时候在大瓶中自溶。具体表现为，细菌OD长不上去。最近两次，一次在大瓶中，小瓶子摇浓后，转入大瓶中，OD长到0.5就上不去，然后菌体溶解；另一次是1ml转入小瓶中，摇过夜早上过来发现出现同样的问题。同实验室的人，有将种子按相同条件接入M9中，结果一瓶自溶，一瓶能正常生长。因为做标记，不可以使用M9+LB混合培养基，以及添加额外的碳源和氮源。求高手解答！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2010-12-21 09:58:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)
jqq1985(金币+2): 2010-12-21 13:03:47
引用回帖:
Originally posted by jqq1985 at 2010-12-21 11:12:48:

是这样的，我自溶后溶液会变得澄清，同时有絮状物，絮状物的多少与自溶前的菌体量有关。有什么好的方法来保证不发生自溶吗，M9配方中的维生素和微量矿物质都加了，也没有什么太大改善。应该不是噬菌体，因为，实 ...

试剂都新配试试看，用太久的母液容易出问题。
赞一下 回复此楼
4楼2010-12-21 11:17:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

susizheng

木虫 (著名写手)
★
jqq1985(金币+2): 2010-12-21 11:13:29
rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~~ 2010-12-21 11:23:46
这个问题我们实验室也经常出现。看你自溶后培养基中是否有絮状沉淀生成，如果有，说明只是一般的试剂污染，解决办法是，M9的分开配置的母液一次不要配太多，最好还是现用现配。如果自溶后，培养基澄清，那就可能噬菌体污染了，问题就严重了。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-12-21 10:51:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jqq1985

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by jqq1985 at 2010-12-21 09:58:17:
最近在做蛋白的标记，用的是BL21（DE3），开始用4mlLB摇菌摇浓，然后转1ml到70mlM9中扩大，最后转入700 ML M9中再放大并诱导表达。做的过程中发现，细菌在LB中生长稳定，转入小体积M9中和大体积M9中会发生自溶现象 ...

是这样的，我自溶后溶液会变得澄清，同时有絮状物，絮状物的多少与自溶前的菌体量有关。有什么好的方法来保证不发生自溶吗，M9配方中的维生素和微量矿物质都加了，也没有什么太大改善。应该不是噬菌体，因为，实验室中没有做噬菌体的，并且，同一个瓶子上次用好好的，这次就会自溶下次又不会了。
赞一下 回复此楼
3楼2010-12-21 11:12:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jqq1985

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2010-12-21 11:17:45:

试剂都新配试试看，用太久的母液容易出问题。

我的培养基都是现配现灭的。不使用母液储存。
赞一下 回复此楼
5楼2010-12-21 13:03:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600材料与化工 +6 安全上岸！ 2026-03-16 6/300 2026-03-20 15:07 by lbsjt
[考研] 材料专硕英一数二306 +6 z1z2z3879 2026-03-18 6/300 2026-03-20 08:49 by xingguangj
[考研] 梁成伟老师课题组欢迎你的加入 +9 一鸭鸭哟 2026-03-14 11/550 2026-03-19 17:22 by ！本暗一次！
[考研] 0703化学调剂 +4 18889395102 2026-03-18 4/200 2026-03-19 16:13 by 30660438
[考研] 一志愿天津大学化学工艺专业（081702）315分求调剂 +11 yangfz 2026-03-17 11/550 2026-03-19 15:06 by houyaoxu
[考研] 求调剂，一志愿:南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕，总分289分 +3 @taotao 2026-03-19 3/150 2026-03-19 14:07 by peike
[考研] 328求调剂，英语六级551，有科研经历 +4 生物工程调剂 2026-03-16 12/600 2026-03-19 11:10 by 生物工程调剂
[考研] 332求调剂 +3 ydfyh 2026-03-17 3/150 2026-03-19 10:14 by 功夫疯狂
[教师之家] 焦虑 +9 水冰月月野兔 2026-03-13 13/650 2026-03-19 09:50 by otani
[考研] 材料专业求调剂 +5 hanamiko 2026-03-18 5/250 2026-03-18 20:19 by 星空星月
[考研] 344求调剂 +6 knight344 2026-03-16 7/350 2026-03-18 20:13 by walc
[考研] 一志愿西南交大，求调剂 +4 材化逐梦人 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:22 by 007_lilei
[考研] 收复试调剂生 +4 雨后秋荷 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:16 by elevennnne
[考研] 304求调剂 +12 小熊joy 2026-03-14 13/650 2026-03-18 12:34 by Linda Hu
[考研] 0854，计算机类招收调剂 +3 胡辣汤放糖 2026-03-15 6/300 2026-03-18 12:09 by 上岸上岸……..
[考研] 材料，纺织，生物（0856、0710），化学招生啦 +3 Eember. 2026-03-17 9/450 2026-03-18 10:28 by Eember.
[考研] 材料工程专硕274一志愿211求调剂 +6 薛云鹏 2026-03-15 6/300 2026-03-17 11:05 by 学员h26Tkc
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
[考研] 0703化学调剂 290分有科研经历，论文在投 +7 腻腻gk 2026-03-14 7/350 2026-03-16 10:12 by houyaoxu
[考研] 297一志愿上交085600求调剂 +5 指尖八千里 2026-03-14 5/250 2026-03-14 17:26 by a不易
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭