应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】BL21(DE3) 在M9中发生自溶
71/1返回列表
查看: 1635  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

jqq1985

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】BL21(DE3) 在M9中发生自溶

最近在做蛋白的标记，用的是BL21（DE3），开始用4mlLB摇菌摇浓，然后转1ml到70mlM9中扩大，最后转入700 ML M9中再放大并诱导表达。做的过程中发现，细菌在LB中生长稳定，转入小体积M9中和大体积M9中会发生自溶现象！有时候在70ml中自溶，有时候在大瓶中自溶。具体表现为，细菌OD长不上去。最近两次，一次在大瓶中，小瓶子摇浓后，转入大瓶中，OD长到0.5就上不去，然后菌体溶解；另一次是1ml转入小瓶中，摇过夜早上过来发现出现同样的问题。同实验室的人，有将种子按相同条件接入M9中，结果一瓶自溶，一瓶能正常生长。因为做标记，不可以使用M9+LB混合培养基，以及添加额外的碳源和氮源。求高手解答！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2010-12-21 09:58:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)
★
jqq1985(金币+2): 2010-12-21 11:13:29
rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~~ 2010-12-21 11:23:46
这个问题我们实验室也经常出现。看你自溶后培养基中是否有絮状沉淀生成，如果有，说明只是一般的试剂污染，解决办法是，M9的分开配置的母液一次不要配太多，最好还是现用现配。如果自溶后，培养基澄清，那就可能噬菌体污染了，问题就严重了。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-12-21 10:51:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jqq1985

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by jqq1985 at 2010-12-21 09:58:17:
最近在做蛋白的标记，用的是BL21（DE3），开始用4mlLB摇菌摇浓，然后转1ml到70mlM9中扩大，最后转入700 ML M9中再放大并诱导表达。做的过程中发现，细菌在LB中生长稳定，转入小体积M9中和大体积M9中会发生自溶现象 ...

是这样的，我自溶后溶液会变得澄清，同时有絮状物，絮状物的多少与自溶前的菌体量有关。有什么好的方法来保证不发生自溶吗，M9配方中的维生素和微量矿物质都加了，也没有什么太大改善。应该不是噬菌体，因为，实验室中没有做噬菌体的，并且，同一个瓶子上次用好好的，这次就会自溶下次又不会了。
赞一下 回复此楼
3楼2010-12-21 11:12:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)
jqq1985(金币+2): 2010-12-21 13:03:47
引用回帖:
Originally posted by jqq1985 at 2010-12-21 11:12:48:

是这样的，我自溶后溶液会变得澄清，同时有絮状物，絮状物的多少与自溶前的菌体量有关。有什么好的方法来保证不发生自溶吗，M9配方中的维生素和微量矿物质都加了，也没有什么太大改善。应该不是噬菌体，因为，实 ...

试剂都新配试试看，用太久的母液容易出问题。
赞一下 回复此楼
4楼2010-12-21 11:17:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jqq1985

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2010-12-21 11:17:45:

试剂都新配试试看，用太久的母液容易出问题。

我的培养基都是现配现灭的。不使用母液储存。
赞一下 回复此楼
5楼2010-12-21 13:03:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hausippe

禁虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
6楼2011-10-23 19:07:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

donng

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
我们也有遇到，而且自溶的菌继续培养下去还会长出来，不知道你们有没有遇到，我初步怀疑是菌种的问题。
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2011-11-08 15:44:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jqq1985 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +3 暗涌afhb 2026-03-16 3/150 2026-03-20 00:28 by 河南大学校友
[考研] 0703化学调剂 +10 妮妮ninicgb 2026-03-15 14/700 2026-03-19 22:59 by 学员8dgXkO
[考研] 307求调剂 +9 冷笙123 2026-03-17 9/450 2026-03-19 22:44 by 学员8dgXkO
[考研] 085600材料与化工 求调剂 +14 enenenhui 2026-03-13 15/750 2026-03-19 21:53 by allen-yin
[考研] 一志愿南京理工大学085701资源与环境302分求调剂 +3 葵梓卫队 2026-03-18 5/250 2026-03-19 19:35 by 给你你注意休息
[考研] 271材料工程求调剂 +6 .6lL 2026-03-18 6/300 2026-03-19 15:41 by haoshis
[考研] 一志愿西安交通大学材料工程专业 282分求调剂 +5 枫桥ZL 2026-03-18 7/350 2026-03-19 14:52 by 功夫疯狂
[考研] 一志愿中海洋材料工程专硕330分求调剂 +7 小材化本科 2026-03-18 7/350 2026-03-19 10:46 by Linda Hu
[考研] 材料专硕306英一数二 +10 z1z2z3879 2026-03-16 13/650 2026-03-18 14:20 by 007_lilei
[考研] 收复试调剂生 +4 雨后秋荷 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:16 by elevennnne
[考研] 0703化学调剂 +3 妮妮ninicgb 2026-03-17 3/150 2026-03-18 10:29 by macy2011
[考研] 0703化学336分求调剂 +6 zbzihdhd 2026-03-15 7/350 2026-03-18 09:53 by zhukairuo
[考研] 332求调剂 +6 Zz版 2026-03-13 6/300 2026-03-17 17:03 by ruiyingmiao
[考研] 302求调剂 +4 小贾同学123 2026-03-15 8/400 2026-03-17 10:33 by 小贾同学123
[论文投稿] 有没有大佬发小论文能带我个二作 +3 增锐漏人 2026-03-17 4/200 2026-03-17 09:26 by xs74101122
[考研] 机械专硕325，寻找调剂院校 +3 y9999 2026-03-15 5/250 2026-03-16 19:58 by y9999
[考研] 求老师收留调剂 +4 jiang姜66 2026-03-14 5/250 2026-03-15 20:11 by Winj1e
[考研] 复试调剂 +3 呼呼？~+123456 2026-03-14 3/150 2026-03-14 16:53 by WTUChen
[考研] 328求调剂 +3 5201314Lsy！ 2026-03-13 6/300 2026-03-14 15:31 by hyswxzs
[考研] 266求调剂 +4 学员97LZgn 2026-03-13 4/200 2026-03-14 08:37 by zhukairuo
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭