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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】BL21(DE3) 在M9中发生自溶
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jqq1985

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】BL21(DE3) 在M9中发生自溶

最近在做蛋白的标记，用的是BL21（DE3），开始用4mlLB摇菌摇浓，然后转1ml到70mlM9中扩大，最后转入700 ML M9中再放大并诱导表达。做的过程中发现，细菌在LB中生长稳定，转入小体积M9中和大体积M9中会发生自溶现象！有时候在70ml中自溶，有时候在大瓶中自溶。具体表现为，细菌OD长不上去。最近两次，一次在大瓶中，小瓶子摇浓后，转入大瓶中，OD长到0.5就上不去，然后菌体溶解；另一次是1ml转入小瓶中，摇过夜早上过来发现出现同样的问题。同实验室的人，有将种子按相同条件接入M9中，结果一瓶自溶，一瓶能正常生长。因为做标记，不可以使用M9+LB混合培养基，以及添加额外的碳源和氮源。求高手解答！
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1楼 2010-12-21 09:58:17
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jqq1985

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by jqq1985 at 2010-12-21 09:58:17:
最近在做蛋白的标记，用的是BL21（DE3），开始用4mlLB摇菌摇浓，然后转1ml到70mlM9中扩大，最后转入700 ML M9中再放大并诱导表达。做的过程中发现，细菌在LB中生长稳定，转入小体积M9中和大体积M9中会发生自溶现象 ...

是这样的，我自溶后溶液会变得澄清，同时有絮状物，絮状物的多少与自溶前的菌体量有关。有什么好的方法来保证不发生自溶吗，M9配方中的维生素和微量矿物质都加了，也没有什么太大改善。应该不是噬菌体，因为，实验室中没有做噬菌体的，并且，同一个瓶子上次用好好的，这次就会自溶下次又不会了。
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3楼2010-12-21 11:12:48
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susizheng

木虫 (著名写手)
★
jqq1985(金币+2): 2010-12-21 11:13:29
rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~~ 2010-12-21 11:23:46
这个问题我们实验室也经常出现。看你自溶后培养基中是否有絮状沉淀生成，如果有，说明只是一般的试剂污染，解决办法是，M9的分开配置的母液一次不要配太多，最好还是现用现配。如果自溶后，培养基澄清，那就可能噬菌体污染了，问题就严重了。
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2楼2010-12-21 10:51:08
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susizheng

木虫 (著名写手)
jqq1985(金币+2): 2010-12-21 13:03:47
引用回帖:
Originally posted by jqq1985 at 2010-12-21 11:12:48:

是这样的，我自溶后溶液会变得澄清，同时有絮状物，絮状物的多少与自溶前的菌体量有关。有什么好的方法来保证不发生自溶吗，M9配方中的维生素和微量矿物质都加了，也没有什么太大改善。应该不是噬菌体，因为，实 ...

试剂都新配试试看，用太久的母液容易出问题。
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4楼2010-12-21 11:17:45
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jqq1985

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2010-12-21 11:17:45:

试剂都新配试试看，用太久的母液容易出问题。

我的培养基都是现配现灭的。不使用母液储存。
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5楼2010-12-21 13:03:36
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