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jqq1985

银虫 (正式写手)


[交流] 【求助/交流】BL21(DE3) 在M9中发生自溶

最近在做蛋白的标记,用的是BL21(DE3),开始用4mlLB摇菌摇浓,然后转1ml到70mlM9中扩大,最后转入700 ML M9中再放大并诱导表达。做的过程中发现,细菌在LB中生长稳定,转入小体积M9中和大体积M9中会发生自溶现象!有时候在70ml中自溶,有时候在大瓶中自溶。具体表现为,细菌OD长不上去。最近两次,一次在大瓶中,小瓶子摇浓后,转入大瓶中,OD长到0.5就上不去,然后菌体溶解;另一次是1ml转入小瓶中,摇过夜早上过来发现出现同样的问题。同实验室的人,有将种子按相同条件接入M9中,结果一瓶自溶,一瓶能正常生长。因为做标记,不可以使用M9+LB混合培养基,以及添加额外的碳源和氮源。求高手解答!
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jqq1985

银虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by jqq1985 at 2010-12-21 09:58:17:
最近在做蛋白的标记,用的是BL21(DE3),开始用4mlLB摇菌摇浓,然后转1ml到70mlM9中扩大,最后转入700 ML M9中再放大并诱导表达。做的过程中发现,细菌在LB中生长稳定,转入小体积M9中和大体积M9中会发生自溶现象 ...

是这样的,我自溶后溶液会变得澄清,同时有絮状物,絮状物的多少与自溶前的菌体量有关。有什么好的方法来保证不发生自溶吗,M9配方中的维生素和微量矿物质都加了,也没有什么太大改善。应该不是噬菌体,因为,实验室中没有做噬菌体的,并且,同一个瓶子上次用好好的,这次就会自溶下次又不会了。
3楼2010-12-21 11:12:48
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jqq1985(金币+2): 2010-12-21 11:13:29
rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~~ 2010-12-21 11:23:46
这个问题我们实验室也经常出现。看你自溶后培养基中是否有絮状沉淀生成,如果有,说明只是一般的试剂污染,解决办法是,M9的分开配置的母液一次不要配太多,最好还是现用现配。如果自溶后,培养基澄清,那就可能噬菌体污染了,问题就严重了。
2楼2010-12-21 10:51:08
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jqq1985(金币+2): 2010-12-21 13:03:47
引用回帖:
Originally posted by jqq1985 at 2010-12-21 11:12:48:

是这样的,我自溶后溶液会变得澄清,同时有絮状物,絮状物的多少与自溶前的菌体量有关。有什么好的方法来保证不发生自溶吗,M9配方中的维生素和微量矿物质都加了,也没有什么太大改善。应该不是噬菌体,因为,实 ...

试剂都新配试试看,用太久的母液容易出问题。
4楼2010-12-21 11:17:45
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jqq1985

银虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2010-12-21 11:17:45:

试剂都新配试试看,用太久的母液容易出问题。

我的培养基都是现配现灭的。不使用母液储存。
5楼2010-12-21 13:03:36
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