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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】原核表达羊基因，cDNA长度约为3kb，基因为一种有活性的酶
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tongxinkxy

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】原核表达羊基因，cDNA长度约为3kb，基因为一种有活性的酶

原核表达羊基因，cDNA长度约为3kb，基因为一种有活性的酶
请问是否原核表达就可以？
请问宿主菌或者其他方面有什么注意事项吗？
在原核表达时有什么注意事项吗？
目的序列已经有了，请问设计引物时，是从哪里开始设计引物呢？
谢谢解答，小女子不胜感激
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1楼2010-12-20 19:38:46
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tongxinkxy

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by rioarsenal at 2010-12-21 02:46:33:
基因长度不是问题，不过翻译后加工很是问题。

E.coli中表达的蛋白质很多都是包涵体，经过一番折腾，纯化后，活性多少都会损失；

你可以用原核试试，如果活性可以，分离容易，就用。不好用的话，就用酵母好了。

请问用酵母和细胞有什么区别？
哪个对实验室的要求比较高？
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8楼2010-12-21 08:43:51
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
amisking(金币+2):good！ 2010-12-20 20:53:28
tongxinkxy(金币+1): 2010-12-20 23:10:15
一般从编码的第一个氨基酸开始设计引物
原核表达不一定可行的，偏爱密码子不一样，而且真核生物表达后修饰比较多，比如糖基化，原核生物没有这种功能。
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2楼2010-12-20 20:05:33
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tongxinkxy

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2010-12-20 20:05:33:
一般从编码的第一个氨基酸开始设计引物
原核表达不一定可行的，偏爱密码子不一样，而且真核生物表达后修饰比较多，比如糖基化，原核生物没有这种功能。

是不是我确定目的蛋白翻译后加工确定有糖基化过程，就100%不能用原核表达呢？谢谢
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3楼2010-12-20 20:18:29
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ben1147

木虫 (正式写手)
tongxinkxy(金币+1): 2010-12-20 23:10:00
tongxinkxy(金币+1):2 2010-12-21 13:55:30
引用回帖:
Originally posted by tongxinkxy at 2010-12-20 20:18:29:

是不是我确定目的蛋白翻译后加工确定有糖基化过程，就100%不能用原核表达呢？谢谢

不光糖基化，翻译后修饰很多种的，都要考虑一下。但是即使需要修饰也不一定不能做原核表达，也许只是活性上有差异而已。看你是要干什么用了，测酶学参数？做抗体？
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4楼2010-12-20 22:20:38
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