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【求助/交流】原核表达羊基因,cDNA长度约为3kb,基因为一种有活性的酶
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tongxinkxy
银虫
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[交流]
【求助/交流】原核表达羊基因,cDNA长度约为3kb,基因为一种有活性的酶
原核表达羊基因,cDNA长度约为3kb,基因为一种有活性的酶
请问是否原核表达就可以?
请问宿主菌或者其他方面有什么注意事项吗?
在原核表达时有什么注意事项吗?
目的序列已经有了,请问设计引物时,是从哪里开始设计引物呢?
谢谢解答,小女子不胜感激
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2010-12-20 19:38:46
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tongxinkxy
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Originally posted by
rioarsenal
at 2010-12-21 02:46:33:
基因长度不是问题,不过翻译后加工很是问题。
E.coli中表达的蛋白质很多都是包涵体,经过一番折腾,纯化后,活性多少都会损失;
你可以用原核试试,如果活性可以,分离容易,就用。不好用的话,就用酵母好了。
请问用酵母和细胞有什么区别?
哪个对实验室的要求比较高?
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8楼
2010-12-21 08:43:51
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lxj341401
至尊木虫
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amisking(金币+2):good! 2010-12-20 20:53:28
tongxinkxy(金币+1): 2010-12-20 23:10:15
一般从编码的第一个氨基酸开始设计引物
原核表达不一定可行的,偏爱密码子不一样,而且真核生物表达后修饰比较多,比如糖基化,原核生物没有这种功能。
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2楼
2010-12-20 20:05:33
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tongxinkxy
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Originally posted by
lxj341401
at 2010-12-20 20:05:33:
一般从编码的第一个氨基酸开始设计引物
原核表达不一定可行的,偏爱密码子不一样,而且真核生物表达后修饰比较多,比如糖基化,原核生物没有这种功能。
是不是我确定目的蛋白翻译后加工确定有糖基化过程,就100%不能用原核表达呢?谢谢
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2010-12-20 20:18:29
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tongxinkxy(金币+1): 2010-12-20 23:10:00
tongxinkxy(金币+1):2 2010-12-21 13:55:30
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Originally posted by
tongxinkxy
at 2010-12-20 20:18:29:
是不是我确定目的蛋白翻译后加工确定有糖基化过程,就100%不能用原核表达呢?谢谢
不光糖基化,翻译后修饰很多种的,都要考虑一下。但是即使需要修饰也不一定不能做原核表达,也许只是活性上有差异而已。看你是要干什么用了,测酶学参数?做抗体?
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4楼
2010-12-20 22:20:38
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