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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】HRM技术的几个问题
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xwsooo

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】HRM技术的几个问题

我搜索了些HRM的资料看,现在还有些不明白的地方:
1。溶解曲线的差异是根据碱基含量的不同，那么就要求个样品的DNA含量一致才不会影响结果，我提取的是外周血DNA，那么如何保证DNA含量的一致呢？
2。对于一对引物，需不需要要求T m值差异要大些？引物是不是和普通PCR 的引物一样呢？
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1楼 2010-12-15 16:13:25
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欧朵拉

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
1036106楼: Originally posted by sutao1979 at 2010-12-18 00:49:47
你说的应该是SNP差异分析吧，用HRM系列的qpcr机器确实可以分辨，原理是根据melting curve的差异来分辨单个碱基的变化。但是，分辨差异并不需要DNA含量完全一致，如果一致也就是通常的spectrophotometre测就可以 ...

弱弱的请教一下：我现在用HRM作SNP分型，除了模板不同，体系都一样，模板根据紫外分光光度计测OD然后稀释到相同的浓度，可是分型出现了好多组（正常的应该3组），不知道是什么原因，是模板的质量引起的吗？还有，做HRM实验的PCR体系如何优化？现在很茫然···
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17楼2012-12-17 23:13:50
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)
看晕我了，没看明白你的意思
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2楼2010-12-15 16:22:36
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xwsooo

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by silicare at 2010-12-15 16:22:36:
看晕我了，没看明白你的意思

不好意思，我现在先自我解释一下 ，首先HRM技术的精确性受到不同标本中DNA浓度的影响，所以必须先保证DNA 浓度的一致，方法有，用紫外分光光度计测量吸光度，用TE稀释至1.0.
第二，与两条引物的tm差应该无关吧。但我还不明白的是HRM需不需要设计特异性引物，有别于普通PCR引物设计的那种？？/
最后都说HRM成本低，那我想了解如果做500份标本，那么大概要花多少RMB?
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3楼2010-12-15 17:03:02
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)
引用回帖:
Originally posted by xwsooo at 2010-12-15 16:13:25:

我提取的是外周血DNA，那么如何保证DNA含量的一致呢？
  

上边这句话啥意思
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4楼2010-12-15 17:09:29
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