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414941613

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】为什么在浓缩胶的时候漏? 已有9人参与

大家好,我的实验遇到了些问题。
我跑的是垂直的SDS-PAGE,加入梳子后两个半小时拔梳子。每个孔10 μL样品。
样品在跑浓缩胶的时候容易漏,跑一会明显的看到 loading buffer 向下漏,几条细线似地,漏到与分离胶的分界线位置。我疯了。谢谢大家的解答
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daringhong

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-12-15 10:43:34
你制胶的时候,等分离胶凝好后有没有把上层的水吸干?
要把那部分液体吸干后再在上面制浓缩胶的。否则两层胶中间会有不凝固的液体,影响效果。
每天进步一点点~~
2楼2010-12-13 22:30:32
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 414941613 at 2010-12-13 22:02:22:
大家好,我的实验遇到了些问题。
我跑的是垂直的SDS-PAGE,加入梳子后两个半小时拔梳子。每个孔10 μL样品。
样品在跑浓缩胶的时候容易漏,跑一会明显的看到 loading buffer 向下漏,几条细线似地,漏到与分离胶 ...

正如楼上说的,呵呵。不过有个trick就是压胶的时候不用水,而用1%的SDS,这样倒浓缩胶的时候就不用滤纸条吸干了,只要倒尽就OK了,这样一定会凝在一起的。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
3楼2010-12-13 22:35:04
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414941613

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by daringhong at 2010-12-13 22:30:32:
你制胶的时候,等分离胶凝好后有没有把上层的水吸干?
要把那部分液体吸干后再在上面制浓缩胶的。否则两层胶中间会有不凝固的液体,影响效果。

首先谢谢你的解答。我的样品在刚出孔一会就有蓝色的buffer 向下漏,还没有到分界线的位置,而且实验室的其它人也是这样做的,却没有出现我这样的情况。我这种情况感觉是胶的内部有细小的缝隙。
4楼2010-12-13 23:08:15
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414941613

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2010-12-13 22:35:04:



正如楼上说的,呵呵。不过有个trick就是压胶的时候不用水,而用1%的SDS,这样倒浓缩胶的时候就不用滤纸条吸干了,只要倒尽就OK了,这样一定会凝在一起的。

谢谢你的解答和建议。我以前的压胶是用水或者是异丁醇,实验室的人都用水压胶的,他们都没有出现这种情况,只有我的出现。
5楼2010-12-13 23:13:04
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 414941613 at 2010-12-13 23:13:04:

谢谢你的解答和建议。我以前的压胶是用水或者是异丁醇,实验室的人都用水压胶的,他们都没有出现这种情况,只有我的出现。

你拿别人配好的胶试试看还有这样的情况发生么。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
6楼2010-12-13 23:16:53
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414941613

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2010-12-13 23:16:53:



你拿别人配好的胶试试看还有这样的情况发生么。

我一个师兄下午也跑SDS,我看看他的操作过程吧。谢谢你。
7楼2010-12-14 08:47:44
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

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dhd997(金币+1):热心鼓励 2010-12-15 10:43:54
引用回帖:
Originally posted by 414941613 at 2010-12-14 08:47:44:

我一个师兄下午也跑SDS,我看看他的操作过程吧。谢谢你。

操作过程应该没有什么问题,你用他配的一块儿胶看看是不是你配胶的问题。先排除了这个问题再看是不是你操作的问题,
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
8楼2010-12-14 08:49:53
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414941613

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2010-12-14 08:49:53:



操作过程应该没有什么问题,你用他配的一块儿胶看看是不是你配胶的问题。先排除了这个问题再看是不是你操作的问题,

这倒也是,我看看。
9楼2010-12-14 12:23:20
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10楼2010-12-14 12:39:50
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