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【求助/交流】恳求：如何进行序列拼接 已有6人参与
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请问各位如何将测得的序列进行拼接啊，要是有详细的图文解析那就更感谢啦， O(∩_∩)O~ |
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wywangying169
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3楼2010-12-03 16:48:31
wywangying169
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用ContigExpress软件就可以拼接
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1949stone(金币+4):够热心 鼓励 2010-12-03 16:56:03
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此名为ContigExpress的软件可用于做序列拼接，主要使用方法如下： 1. 解压缩下载的压缩文件contig.zip文件，保证文件CExpress.exe,Gexudat.def在同一个目录下，打开Cexpress.exe应用程序，进入ContigExpress操作界面，如图1。 图1 2. 点击菜单上的“Project”选择“Add Fragments”，一般我们发给您的是AB1文件，如果您有其它格式的文件，也可以选择，在这里我们选择AB1文件，以其为例，如图2。 图2 3. 选择您存放AB1文件（即我们Email给您的测序结果的彩图文件）的目录，选择文件类型为ALL FILES, 之后打开要拼接的AB1，从而添加进ContigExpress软件。在此以A、B两个序列为例，如果有多个序列的也可以同时添加进入。 图3 4. 选中要拼接的序列，再选菜单 “Assemble”栏下的“Assemble Selected Fragments”命令，或用工具栏上的按钮，如图3。若两个结果能够拼接起来的，会得到一个Assemble1下的contig1的结果，如图4。 图4 5. 双击contig1，打开拼接后的结果，选中菜单“VIEW”栏，进入VIEW OPTION，将SHOW ALIGNMENT AS 由 TEXT 改为 GRAPH.，点击OK 后得到结果如图5。此时可能会因为两条序列的测序结果误差，会有不同的地方，在拼接图片框中的绿色竖杠就表示了这些不同的地方，如图所示。接着可点击绿色竖杠找到有误差的地方，进行修改。 6. 在修改过程中，遇到有误差的地方，可以根据峰形来判断是多读还是漏读来进行修改，此时电脑认为是漏读碱基的地方会以点来表示，如图5，此处很明显是A序列上多读了一个G碱基，可将其删除。（注：因为软件本身的问题，只有在拼接过程中是正向的序列才能进行修改操作，若在反向上修改碱基，保存时会产生错误而直接关闭程序。所以若要修改反向序列上的碱基，可先保存后，把原有的Assemble1的结果拆开，点序列图标上的“Name”，如图3，所选中的序列上的一个“name”横栏，使序列按Name的升降次序来排列，把要作为正向的序列放到要作为反向序列上面即可。以此序列为例，将其改变方向后可实现反向拼接，如图6。此时反向拼接中，电脑也会将整条序列自动进行反向互补。若有多条序列只要让反向序列在正向序列上即可。建议最好是修改一个碱基后就保存一下，然后拆开了再拼接，这样可以最大程度地避免误差。） 图5 图6 7. 全部修改完成后，所有的绿色竖杠就消失了，但电脑对那些个别碱基不同，即没有多读或漏读的现象，不会用绿色竖杠标出，这样也就是说，在整个序列中还有误差存在，所以这时我们就需要用到工具栏上的另一个按钮“find next ambiguous”，如图7，来找序列中因两条序列碱基不同而出现的N值，需要记住此时也只能在正链上进行修改。如图，此处依据峰形可确定A链上的C应该为A，把它校正即可。 图7 8. 经过校正和修改之后，两条序列的重叠部分已经完全一致，序列已经拼通，可以把整个拼接结果保存下来，若想拷贝并保存整条序列，可以右击contig1选取“Select All”，再选“Copy sequence from … bp to … bp”，如图8。然后打开可存放文本的应用程序，如记事本，把整个序列粘贴进去，保存即可。 图8 |
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