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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】大肠杆菌越摇越清，怎么回事
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yangjunzju

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】大肠杆菌越摇越清，怎么回事

如题，最近我摇了几瓶大肠杆菌（重组菌，AMP抗性），OD600 nm能长到0.5，加入诱导剂后（两种质粒，分别用IPTG和阿拉伯糖诱导），发现半小时左右菌液开始变澄清，最后变成接近培养基颜色，里面有一些絮状物的沉淀，不知道是不是菌体死亡的残骸，但是继续培养（过夜，>8h)又能长出来。。。继续变混浊。。。这是什么原因呢，我百思不得其解。。还请各位指点！！非常感谢~
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1楼 2010-11-30 11:06:55
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
yangjunzju(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+2):good 2010-11-30 15:07:51
烈性噬菌体污染后会将细菌裂解，导致培养液澄清。但根据lz描述的情况，应该是染菌了。加入诱导剂之前你的目标菌占优势，但加入诱导剂后可能诱导了对菌体有害的产物，导致细菌死亡，表现为培养液澄清。8h后，杂菌生长，表现为逐渐浑浊。

最直接的解决方法支持2楼
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10楼2010-11-30 13:32:42
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普通回帖

leiyinwill

银虫 (小有名气)
★
yangjunzju(金币+1):谢谢参与
前一段时间我就出现过类似的问题，师兄给我分析可能是因为染菌了。我就重新划线，挑单克隆培养，最后扩大培养，每一步严格无菌操作，现在问题解决了。
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2楼2010-11-30 12:05:34
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)
★
yangjunzju(金币+1):谢谢参与
重新做吧。严格把关。
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3楼2010-11-30 12:09:00
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Jeff_tian

木虫 (著名写手)
★
yangjunzju(金币+1):谢谢参与
反复测试
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4楼2010-11-30 12:17:41
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
★
yangjunzju(金币+1):谢谢参与
又没有可能受到噬菌体污染？
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5楼2010-11-30 12:26:53
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)
★
yangjunzju(金币+1):谢谢参与
有可能是由于某些原因诱导物加入后诱导菌体死亡了
后来长菌了可能是杂菌
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6楼2010-11-30 12:30:28
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一碗水端平

木虫 (职业作家)
★
yangjunzju(金币+1):谢谢参与
可能是噬菌体污染了
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7楼2010-11-30 12:46:16
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林祎

木虫 (正式写手)
★
yangjunzju(金币+1):谢谢参与
噬菌体污染了，一般不会变澄清的
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8楼2010-11-30 13:02:13
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)
★ ★ ★
yangjunzju(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+2):good 2010-11-30 15:07:40
还有一个可能就是毒蛋白的表达，这和你的IPTG加入正好符合

加入后毒蛋白表达，导致细胞死亡或活力下降，等iptg消耗降解了，或者一些不表达蛋白的菌长起来，有重新浑浊了

没看到具体情况，只能推测
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9楼2010-11-30 13:30:39
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forestwarm

金虫 (小有名气)
★
yangjunzju(金币+1):谢谢参与
肯定是噬菌体污染，曾经有过这样的事情
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11楼2010-12-02 11:42:09
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邓远洪dyh

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
好好观察一下，如果有碎片，那基本上可以断定是感染噬菌体了
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12楼2010-12-02 17:20:37
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安安227

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
407912楼: Originally posted by silicare at 2010-11-30 13:30:39:
还有一个可能就是毒蛋白的表达，这和你的IPTG加入正好符合

加入后毒蛋白表达，导致细胞死亡或活力下降，等iptg消耗降解了，或者一些不表达蛋白的菌长起来，有重新浑浊了

没看到具体情况，只能推测

iptg不参与代谢
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13楼2012-05-16 00:37:00
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安安227

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
475136楼: Originally posted by forestwarm at 2010-12-02 11:42:09:
肯定是噬菌体污染，曾经有过这样的事情

既然是污染噬菌体，那为何后来又回变浑浊？
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14楼2012-05-16 00:37:57
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
1965430楼: Originally posted by 安安227 at 2012-05-16 00:37:00:
iptg不参与代谢

你说的是理论上不参与微生物的生理代谢，但实际上作为试剂，本身就存在自身降解消耗和失效的问题，这才是实验中最重要的优化因素，不要读死书，尽信书不如无书……
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15楼2012-05-16 08:12:11
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forestwarm

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
1965431楼: Originally posted by 安安227 at 2012-05-16 00:37:57:
既然是污染噬菌体，那为何后来又回变浑浊？

后期变浑浊是由于，有一部分噬菌体整合到细菌上，成为了溶源性细菌，可以继续繁殖呀，但随时有再爆发的可能性。
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安安227
16楼2012-05-16 21:10:09
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安安227

铁虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
1965520楼: Originally posted by forestwarm at 2012-05-16 21:10:09:
后期变浑浊是由于，有一部分噬菌体整合到细菌上，成为了溶源性细菌，可以继续繁殖呀，但随时有再爆发的可能性。

谢谢，学习了！
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17楼2012-05-17 10:23:05
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myloverlr

金虫 (小有名气)
应该是噬菌体污染
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18楼2012-06-27 10:44:50
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可蕊

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主使用大肠杆菌是什么？有没有测序过。我们实验室也出现过这个现象，最后怀疑是大肠杆菌带有噬菌体的基因引起的
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19楼2013-03-10 15:07:19
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mhymhy1987

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
请问你的问题解决了吗 ？怎么解决的 我现在也出现这问题
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20楼2013-05-29 16:55:30
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