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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】酶切后浓缩的问题
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pidou213

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】酶切后浓缩的问题

酶切完成以后，要电转，但是有两个问题：
1、酶切后，DNA浓度太低
2、若浓缩，因为有BSA参与了酶切反应，用真空浓缩后，甘油浓度很高，影响电转，甚至击穿电转杯。

不知道大家是怎么做的?在尽可能少的减少目的DNA损失的情况下。
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1楼 2010-11-27 00:15:40
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pidou213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by wmqouc at 2010-11-28 19:20:04:
你怎么直接把酶切产物直接电转到菌里吗？
线性的DNA产物吗？
奇怪啊。

可以加入无水乙醇过夜沉淀，第二天离心去掉上清，再加入水或你用的buffer溶解，就达到浓缩目的了

好的啊，谢谢啊
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15楼2010-11-29 16:05:41
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wangy0908

金虫 (正式写手)
★
silicare(金币+1):这个可以考虑的 2010-11-27 08:20:11
那你就用醋酸钠和无水乙醇再抽提一次的，相当于DNA纯化。这样在加适当的水或者其他溶解，浓度就可以了的
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2楼2010-11-27 00:32:28
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pidou213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by wangy0908 at 2010-11-27 00:32:28:
那你就用醋酸钠和无水乙醇再抽提一次的，相当于DNA纯化。这样在加适当的水或者其他溶解，浓度就可以了的

这样的回收率能达到多少呢？
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3楼2010-11-27 01:18:33
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
pidou213(金币+1):可否指点一二，哪里有卖的? 2010-11-29 16:03:29
有卖那种很便宜的核酸共沉剂，加了一些东西当DNA沉淀指示的，回收率高很多
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4楼2010-11-27 09:15:19
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