应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】酶切后浓缩的问题
51/1返回列表
查看: 1910  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

pidou213

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】酶切后浓缩的问题

酶切完成以后，要电转，但是有两个问题：
1、酶切后，DNA浓度太低
2、若浓缩，因为有BSA参与了酶切反应，用真空浓缩后，甘油浓度很高，影响电转，甚至击穿电转杯。

不知道大家是怎么做的?在尽可能少的减少目的DNA损失的情况下。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2010-11-27 00:15:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wmqouc

金虫 (著名写手)
pidou213(金币+2):是线性化的，你的意思是，不需要加氯仿那一步吗？那BSA等怎没去出呢？ 2010-11-29 16:07:23
你怎么直接把酶切产物直接电转到菌里吗？
线性的DNA产物吗？
奇怪啊。

可以加入无水乙醇过夜沉淀，第二天离心去掉上清，再加入水或你用的buffer溶解，就达到浓缩目的了
赞一下 回复此楼
13楼2010-11-28 19:20:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

wangy0908

金虫 (正式写手)
★
silicare(金币+1):这个可以考虑的 2010-11-27 08:20:11
那你就用醋酸钠和无水乙醇再抽提一次的，相当于DNA纯化。这样在加适当的水或者其他溶解，浓度就可以了的
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-11-27 00:32:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pidou213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by wangy0908 at 2010-11-27 00:32:28:
那你就用醋酸钠和无水乙醇再抽提一次的，相当于DNA纯化。这样在加适当的水或者其他溶解，浓度就可以了的

这样的回收率能达到多少呢？
赞一下 回复此楼
3楼2010-11-27 01:18:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
pidou213(金币+1):可否指点一二，哪里有卖的? 2010-11-29 16:03:29
有卖那种很便宜的核酸共沉剂，加了一些东西当DNA沉淀指示的，回收率高很多
赞一下 回复此楼
4楼2010-11-27 09:15:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭