| 查看: 4127 | 回复: 20 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
【求助/交流】连接转化长菌有质粒，但是没有目的片段，怎么回事？？ 已有10人参与
|
|||
|
向各位高手请教：回收连接转化哪里出了问题？ 实验过程是这样的： 目的片段只有700多bp，是普通的PCR产物经过回收试剂盒（bioer）回收得到，条带也很亮，也很单一. 连接是在PCR仪中16度连接的，十二个小时左右，然后用TAKARAde pmd18t载体连接的，而后转入感受态中，培养十二小时之后，菌长的很少，蓝白斑都有，但是白斑都是假阳性，有质粒的序列，却没有目的片段。于是我猜想或许是我加样的问题，而后又重新做了一次，依然如此，白斑都是假阳性，质粒的空载体。然后换了一个连接的试剂盒，PGEM载体连接，这次菌长的都少了，而且蓝斑很多，两个板子一个没有长，一个上面只挑得出五个单克隆。经过检测都是假阳性，没有目的片段。不知道是哪里出了问题，感受态是最近几天配的，有菌落长出来，应该不是感受态的问题吧？蓝白斑筛选也没有错，会不会x-gal和IPTG失效，可是有蓝斑也有白斑，应该不是他们吧，其他的我就不知道了，pmd18-T质粒是新买的，按理说也不会的吧，培养基都是新配的。在我之后我师兄做了几次连接也是相同的情况，只有空的质粒，没有目的片段，而且平板上都是蓝斑，白斑很少，不知道哪里有问题，请各位精通的大师帮忙分析一下~~万分感谢！！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有111人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- pMD18-T载体与目的基因连接后构建的质粒能通过接合转移到一些难以转化的细菌中吗？
已经有8人回复
- 做酶切连接后转化再提质粒，质粒明显变小，Why???
已经有24人回复
- 将质粒上紧挨着的两个酶切位点进行双酶切后连接外源基因片段，是不是不好连接？
已经有13人回复
- 目的片段和T1载体连接后转入感受态细胞涂板子总不长菌……
已经有7人回复
- 携带kan抗性的质粒载体菌株在含Amp抗性的平板上生长，这是怎么回事？
已经有7人回复
- 【求助/交流】大肠杆菌转化质粒，出来的不是我要的了，怎么回事？
已经有13人回复
- 【求助/交流】质粒跟目的基因连接不上怎么办
已经有17人回复
- 【求助/交流】连接产物转化后菌落PCR正确，提取的质粒却比空质粒还小？
已经有4人回复
- 【求助/交流】转有空质粒的菌跟转有目的基因的重组质粒的菌哪个生长快？
已经有3人回复
- 【求助/交流】为什么质粒转化后晒出的菌在原培养基上长不出
已经有5人回复
6楼2010-11-26 20:16:33
天使托
专家顾问 (职业作家)
T.Shen
-
专家经验: +57 - MolEPI: 106
- 应助: 95 (初中生)
- 贵宾: 0.263
- 金币: 16299.3
- 散金: 593
- 红花: 74
- 沙发: 9
- 帖子: 3659
- 在线: 290.6小时
- 虫号: 441757
- 注册: 2007-10-27
- 专业: 微生物生理与生物化学
- 管辖: 微生物
2楼2010-11-26 17:53:51
3楼2010-11-26 18:16:58
4楼2010-11-26 18:19:54
投票:
30