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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 实验室分析、仪器 » 【求助】紫外分光测吸光度不稳定
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janny22092

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助】紫外分光测吸光度不稳定已有5人参与

蜜的脱色实验，在测定其吸光度的时候，变数较大。不同的时间测出来的吸光度数据不一样，不知道是什么因素影响的。
    还有一个问题，就是空白实验做对比的时候，是用原始的稀释倍数相同的糖蜜呢，还是不加脱色剂而其他的处理步骤都要走一遍之后所得到的糖蜜。
    注：糖蜜本身静置一段时间会出现沉淀，离心也会有沉淀，还有，不加脱色剂只是在一定条件下离心后 其吸光度也会变化很多，只是没有加脱色剂之后的明显而已

[ Last edited by lovibond on 2011-11-27 at 19:59 ]
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1楼2010-11-25 14:05:21
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红景天水

木虫 (正式写手)
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lovibond(金币+1):感谢专家耐心解答 2010-11-25 17:17:35
首先，紫外分光光度法测数据本身就很不稳定，受影响比较大。
其次，蜜的脱色程度决定了里面所含影响物质的多少，色素的影响肯定明显的，所以你说不同的时间测出来的数据不同，那是必然的，就是相同时间所测数据也应有波动，因为脱色的方式肯定对其也有影响，充分脱色与未充分脱色对紫外分光比色也是有影响的。
再有就是你说的空白比对，我不明白是什么意思。
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a479967958
2楼2010-11-25 16:55:43
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janny22092

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 红景天水 at 2010-11-25 16:55:43:
首先，紫外分光光度法测数据本身就很不稳定，受影响比较大。
其次，蜜的脱色程度决定了里面所含影响物质的多少，色素的影响肯定明显的，所以你说不同的时间测出来的数据不同，那是必然的，就是相同时间所测数据也 ...

我说的空白对比是这样的，一个是稀释的倍数相同，不加脱色剂，根其他的脱色样品一样先进行搅拌，然后过滤或者离心，再用来作为空白的参比，再一个是只稀释相同的倍数，不搅拌不离心过滤等就用来作为空白的参比液。
    这两个空白我不知道该选用哪一个更合适。谢谢
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3楼2010-11-26 08:30:48
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红景天水

木虫 (正式写手)
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Originally posted by janny22092 at 2010-11-26 08:30:48:

我说的空白对比是这样的，一个是稀释的倍数相同，不加脱色剂，根其他的脱色样品一样先进行搅拌，然后过滤或者离心，再用来作为空白的参比，再一个是只稀释相同的倍数，不搅拌不离心过滤等就用来作为空白的参比液 ...

你这个实验是比较脱色效果？？
你这样做出来的数值是正的还是负的？？
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4楼2010-11-26 08:37:52
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janny22092

金虫 (正式写手)
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Originally posted by 红景天水 at 2010-11-26 08:37:52:

你这个实验是比较脱色效果？？
你这样做出来的数值是正的还是负的？？

这个实验就是看脱色效果的，如果用未处理的稀释液作参比的话，脱色率是百分之好几十，如果用离心过滤之后的稀释液作参比的话脱色率大部分时候是正的，就是百分之几的数值，偶尔会出现负值。
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5楼2010-11-26 09:50:24
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红景天水

木虫 (正式写手)
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树树8013(金币+2):谢谢专家顾问的耐心精彩解答 2010-11-26 11:56:47
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Originally posted by janny22092 at 2010-11-26 09:50:24:

这个实验就是看脱色效果的，如果用未处理的稀释液作参比的话，脱色率是百分之好几十，如果用离心过滤之后的稀释液作参比的话脱色率大部分时候是正的，就是百分之几的数值，偶尔会出现负值。

我认为你应该稀释，离心过滤之后做空白参比
因为离心过滤是物理因素的影响，并不是脱色剂的影响，既然你是比较脱色效果的
所以其它的物理影响因素应该一致
因为你自己也说糖蜜本身就会沉淀的，你脱色之后的样品离心沉淀并不是脱色剂处理的效果啊，是物理因素迫使其澄清的，所以我建议你用相同处理的糖蜜做空白，只是不要加脱色剂就好了。
你认为呢？
这个你可以在你的实验论文中写明条件的，即使答辩老师问起来，你也能明确回答他们。
呵呵，希望能对你有所帮助。
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6楼2010-11-26 10:20:10
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咱家老四

木虫 (著名写手)

浊世俗人痴事妄言
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树树8013(金币+2):谢谢你的耐心精彩解答 2010-11-26 11:53:39
空白应按6楼所述去做，因为所谓空白试验指在不加供试品处理的情况下,按同法操作所得的结果，这样才能尽量排除操作过程对试验效果的影响。
影响紫外吸收的因素：
吸光度值小数点后第三位一般允许正负5个数的偏差，但不同规格、档次的仪器稳定性不同，可以把参比池和检测池都放空白液，看吸光度值随时间的变化，至少记录半天，每半小时记录一次，学校一般都是进口设备，可能比较稳定；
大部分种类的“颜色”是一种容易损失的成分，受氧直接影响而出现损失，并且一般都随光照和升温加速；
与时间也成正相关，你把它常温、常压、光照放半月以上，不用离心和加脱色剂，它也就变浅甚至无色了；
如你所说，蜜沉淀过程就是一个受时间影响的脱色过程，吸光度随时间不同，当然会不同，问题你都发现了，可能主要需要联系起来。
如果算上仪器误差，你的脱色剂好像不怎么起作用，坦白的说。
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垂肩负手，渐行渐远
7楼2010-11-26 11:29:40
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janny22092

金虫 (正式写手)
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Originally posted by 红景天水 at 2010-11-26 08:37:52:

你这个实验是比较脱色效果？？
你这样做出来的数值是正的还是负的？？

你好，想请教一下，最近做的脱色率大部分是负值，不知道是什么原因导致的，操作步骤，还有处理方法全部都是相同的，以前很少出现这种情况，这几天几乎都是这样，所做的空白对比就是不加脱色剂，其它的物理处理方法完全一样。
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8楼2010-12-10 09:58:03
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红景天水

木虫 (正式写手)
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Originally posted by janny22092 at 2010-12-10 09:58:03:

你好，想请教一下，最近做的脱色率大部分是负值，不知道是什么原因导致的，操作步骤，还有处理方法全部都是相同的，以前很少出现这种情况，这几天几乎都是这样，所做的空白对比就是不加脱色剂，其它的物理处理方 ...

这我也就不太明白了
其实吧，一开始我就认为你这个应该是负值。
你出现正值我还觉得奇怪
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9楼2010-12-10 16:41:12
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janny22092

金虫 (正式写手)
★
lovibond(金币+1):鼓励好学的同学 2010-12-12 21:06:20
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Originally posted by 红景天水 at 2010-12-10 16:41:12:



这我也就不太明白了
其实吧，一开始我就认为你这个应该是负值。
你出现正值我还觉得奇怪

加了活性炭脱色之后为什么就变负值了呢，是因为分离不彻底还是什么原因。但是在做最佳稀释比例的时候，也不全是负值，做了四个比例，有一个是正值的，总之就是吸光度不稳，一会一个值，很郁闷！
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10楼2010-12-11 09:16:44
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