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lianyi1989

金虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】关于做荧光定量pcr的模板问题

我是要用荧光定量pcr做昆虫不同时间段的表达量,现在分别提取了不同时间段的rna,是不是要保证反转录的cDNA浓度一致,这样做定量pcr时才比较精确?要保证cDNA的浓度一致的话要怎么做?是不是要根据OD值调整rna的浓度大体一致之后再做反转录?之前没做过荧光定量pcr的,望各位高手指点。
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zuodongyun

铁杆木虫 (正式写手)


lianyi1989(金币+1): 2011-01-15 16:27:27
其实没有必要把CDNA定量,反正都有内参基因比较
我习惯在做逆转录之前测RNA得浓度,用3微克总RNA做逆转录,之后稀释同样的倍数来做模板就可以了
10楼2010-11-25 19:39:16
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)


lianyi1989(金币+1): 2010-11-24 13:21:12
反转录后可以定量CDNA的浓度。
2楼2010-11-24 13:14:19
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lianyi1989

金虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by skkyy88888 at 2010-11-24 13:14:19:
反转录后可以定量CDNA的浓度。

怎样定量cDNA的浓度?能不能说详细点,非常感谢~
3楼2010-11-24 13:21:07
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)


就是测DNA浓度啊。没做过?
4楼2010-11-24 13:25:46
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