应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于做荧光定量pcr的模板问题
131/1返回列表
查看: 4051  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

lianyi1989

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于做荧光定量pcr的模板问题

我是要用荧光定量pcr做昆虫不同时间段的表达量，现在分别提取了不同时间段的rna，是不是要保证反转录的cDNA浓度一致，这样做定量pcr时才比较精确？要保证cDNA的浓度一致的话要怎么做？是不是要根据OD值调整rna的浓度大体一致之后再做反转录？之前没做过荧光定量pcr的，望各位高手指点。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2010-11-24 13:07:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

遨游生命

铁杆木虫 (正式写手)
lianyi1989(金币+1): 2011-01-15 16:27:41
我是按照反转录前吧RNA的浓度再微量分光光度计上测定，调整后，以相同的模板浓度做反转录合成cDNA，然后cDNA就以相同浓度进行荧光定量PCR了。反转录后的cDNA 定量没有必要做的。
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2010-11-25 17:40:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zuodongyun

铁杆木虫 (正式写手)
lianyi1989(金币+1): 2011-01-15 16:27:27
其实没有必要把CDNA定量，反正都有内参基因比较
我习惯在做逆转录之前测RNA得浓度，用3微克总RNA做逆转录，之后稀释同样的倍数来做模板就可以了
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2010-11-25 19:39:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

skkyy88888

铜虫 (著名写手)
lianyi1989(金币+1): 2010-11-24 13:21:12
反转录后可以定量CDNA的浓度。
赞一下 回复此楼
2楼2010-11-24 13:14:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lianyi1989

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by skkyy88888 at 2010-11-24 13:14:19:
反转录后可以定量CDNA的浓度。

怎样定量cDNA的浓度？能不能说详细点，非常感谢~
赞一下 回复此楼
3楼2010-11-24 13:21:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

skkyy88888

铜虫 (著名写手)
就是测DNA浓度啊。没做过？
赞一下 回复此楼
4楼2010-11-24 13:25:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lianyi1989

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by skkyy88888 at 2010-11-24 13:25:46:
就是测DNA浓度啊。没做过？

没有哎~也是测OD值吗？
赞一下 回复此楼
5楼2010-11-25 10:47:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

phyllislhy

木虫 (正式写手)
首先测OD值定RNA浓度，再跑电泳调整微调
赞一下 回复此楼
6楼2010-11-25 11:00:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Lee_Py

银虫 (小有名气)
lianyi1989(金币+1): 2011-01-15 16:27:38
如果 你只是做荧光定量的话 cDNA浓度就不需要一致了 如果你做半定量的话 还是调成一致吧
赞一下 回复此楼
8楼2010-11-25 18:13:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
lstt09nk(金币+1):鼓励交流 2010-11-25 19:32:51
lianyi1989(金币+1): 2011-01-15 16:27:30
我是习惯，同样总量的RNA同一批逆转录成cDNA，同样方法稀释后加同样多去做qPCR

如果cDNA马上做，还是可以不定量的，但如果放了一段时间，最好还是定一下，有些仪器比如nanodrop是能测ssDNA的量的
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2010-11-25 19:31:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hyw1989960

木虫 (正式写手)
lianyi1989(金币+1): 2010-11-26 22:09:06
没有必要把CDNA定量
荧光定量是根据目标基因扩增量和内参基因量的比值计算的，CDNA模板浓度高了，同样内参基因也高，比值没什么变化
赞一下(1人) 回复此楼
11楼2010-11-26 14:54:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wbing498352

金虫 (初入文坛)
相同的模板浓度做反转录合成cDNA,
cDNA浓度就不需要一致
使用2 -△△CT法分析数据
赞一下 回复此楼
12楼2010-11-29 21:14:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

杜越欧

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
那用一次实验同一模板的加看家基因和加目的基因两个反应液中的模板浓度不一样可以么
赞一下 回复此楼
13楼2012-03-28 09:26:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lianyi1989 的主题更新
131/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 急需调剂 +9 绝不放弃22 2026-04-15 10/500 2026-04-18 08:09 by chixmc
[考博] 申博/考博 +3 啃面包的小书虫 2026-04-17 4/200 2026-04-17 23:54 by 阳阳阳^_^
[考研] 320求调剂 +4 深郊akm 2026-04-17 4/200 2026-04-17 17:32 by 一切OK
[考研] 0854求调剂 +21 门路摸摸 2026-04-15 25/1250 2026-04-17 15:45 by qzxyhcsy
[论文投稿] 有没有接收比较快的sci期刊呀，最好在一个月之内的，研三孩子求毕业 20+4 之护着 2026-04-16 5/250 2026-04-17 10:02 by bobvan
[考研] 恳请有学校收留 +8 柯淮然 2026-04-12 8/400 2026-04-17 09:34 by 猪会飞
[考研] 材料相关专业344求调剂双非工科学校或课题组 +23 hualkop 2026-04-12 25/1250 2026-04-16 22:12 by SUSE_CL
[考研] 一志愿沪9，生物学326求调剂 +9 刘墨墨 2026-04-15 9/450 2026-04-16 17:14 by 崔崔崔cccc
[考研] 26药学专硕105500求调剂 +6 喽哈加油 2026-04-13 7/350 2026-04-16 14:31 by zhouxiaoyu
[考博] 申博自荐 +3 Linxia林夏 2026-04-13 3/150 2026-04-16 12:55 by 墨荷之露
[基金申请] RY：中国产出的科学垃圾论文，绝对数量和比例都世界第一 +7 zju2000 2026-04-14 18/900 2026-04-16 11:36 by 欢乐颂叶蓁
[考研] 322求调剂 +8 123安康 2026-04-12 15/750 2026-04-16 11:07 by Espannnnnol
[考研] 297，工科调剂? +10 河南农业大学-能 2026-04-14 10/500 2026-04-15 21:50 by noqvsozv
[考研] 药学求调剂 +11 RussHu 2026-04-12 13/650 2026-04-15 19:07 by zhuwenxu
[考研] 0854调剂 +13 长弓傲 2026-04-12 16/800 2026-04-15 13:45 by fenglj492
[考研] 085801电气专硕272求调剂 +19 电气李 2026-04-13 21/1050 2026-04-15 13:37 by 黑科技矿业
[考研] 各位老师好，求调剂，本科211，一志愿天津大学生物与医药学硕，差两名录取。 +11 路六六jjj 2026-04-13 11/550 2026-04-14 16:01 by zs92450
[考研] 考研调剂 +13 长弓傲 2026-04-13 14/700 2026-04-14 14:44 by zs92450
[考研] 085600材料与化工329分求调剂 +24 叶zilin 2026-04-13 25/1250 2026-04-14 09:20 by 试管破裂
[考研] 考研英一数一338分 +9 长江大学东校区 2026-04-13 10/500 2026-04-14 00:41 by 王珺璞
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭