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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于做荧光定量pcr的模板问题
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lianyi1989

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于做荧光定量pcr的模板问题

我是要用荧光定量pcr做昆虫不同时间段的表达量，现在分别提取了不同时间段的rna，是不是要保证反转录的cDNA浓度一致，这样做定量pcr时才比较精确？要保证cDNA的浓度一致的话要怎么做？是不是要根据OD值调整rna的浓度大体一致之后再做反转录？之前没做过荧光定量pcr的，望各位高手指点。
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1楼 2010-11-24 13:07:38
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
lstt09nk(金币+1):鼓励交流 2010-11-25 19:32:51
lianyi1989(金币+1): 2011-01-15 16:27:30
我是习惯，同样总量的RNA同一批逆转录成cDNA，同样方法稀释后加同样多去做qPCR

如果cDNA马上做，还是可以不定量的，但如果放了一段时间，最好还是定一下，有些仪器比如nanodrop是能测ssDNA的量的
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9楼2010-11-25 19:31:01
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)
lianyi1989(金币+1): 2010-11-24 13:21:12
反转录后可以定量CDNA的浓度。
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2楼2010-11-24 13:14:19
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lianyi1989

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by skkyy88888 at 2010-11-24 13:14:19:
反转录后可以定量CDNA的浓度。

怎样定量cDNA的浓度？能不能说详细点，非常感谢~
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3楼2010-11-24 13:21:07
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)
就是测DNA浓度啊。没做过？
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4楼2010-11-24 13:25:46
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