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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教：酶液对底物的转化问题
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IMB2009

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请教：酶液对底物的转化问题 已有6人参与

各位大牛小牛：
       你们好！有个问题困扰了我好久，希望你们能给小弟指点指点，谢谢！
       我做的是酶液对底物（不溶于水的）的生物转化，然后做产物的结构鉴定。可是转化的效率很低，也就是说产物积累的很少，我试着提高转化的效率，可是转化的效率提高了才一倍，我想问下有没有更好的办法能使我的底物转化成产物更多些呢？也只有底物转化的程度大，才说明我的产物积累的多啊，做了好久了都，产物还没什么好的方法跟踪到，只是底物减少了，而且减少的程度不大，哎......
   我提高转化的条件：1.有机溶剂增加底物溶解，但不影响酶活；
                                   2. 加入了表面活性剂；
                                   3.增加了溶氧；
                                    4.加入了酶的保护剂；
                                   5延长反应时间.
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1楼 2010-11-19 18:44:35
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米菲的旋律

木虫 (著名写手)

Always Keep The Faith！
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-11-29 08:23:46
如果你的目的是要做产物的结构，就必须先优化产物检测方法，不然就算提高底物消耗，产物依旧检测不到，这没有意义。
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物必先腐而后虫生
2楼2010-11-19 19:12:40
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IMB2009

木虫 (小有名气)

老天保佑

哎 我也想跟踪 跑个TLC上次 没看到产物的斑点 也想做下C18反相柱试试能不能分到产物 貌似我的产物的极性不底物高 我想试试梯度洗脱 GOD保佑我能分出来
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3楼2010-11-21 20:09:23
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181587941

金虫 (正式写手)

有些条件可以试试看

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-11-29 08:24:27
不知道你做过哪些优化，比如PH，温度，一些金属离子的加入，如Mg2+，Ca+，看看能不能提高酶的活性。
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4楼2010-11-28 21:18:39
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408851978

木虫 (著名写手)

道圣
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-11-29 08:24:45
可以把产物富集一下，把多次酶液和底物反映后的溶液进行合并富集再测试，应该没有问题。
赞一下(2人) 回复此楼
奋斗是金！
5楼2010-11-29 07:43:33
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yangjun130

铜虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-11-29 08:25:02
其实产率已经翻倍那就是100%的提高了，很不错的成绩咯。

你现在需要做的就是查找国内外文献，看人家有没有比你更高的，你就要去分析为什么人家做的比你的高，那么你就能继续提高咯
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6楼2010-11-29 07:45:49
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flightty

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
不是要产物么，增加加酶量，降低底物浓度，反正你又不是做条件优化
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7楼2010-11-29 15:03:05
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181587941

金虫 (正式写手)

还有个方法

★ ★ ★
看天(金币+3):鼓励分享 2010-12-13 18:39:03
还有个方法，就是培养基中放入稍高浓度的底物，不断的进行传代，估计过个两三个月，菌株产酶能力能提高好几倍，甚至数十倍。这个方法叫做底物诱导提高酶活。方法比较简单，效果明显，但是持续时间较久，要坚持几个月。

你可以没两三天传一代，用固体培养基就可以了。
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8楼2010-12-02 21:27:07
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IMB2009

木虫 (小有名气)

谢谢各位的关注

谢谢各位  我已经在优化反应条件了 争取把实验做出来 呵呵
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9楼2010-12-13 16:29:16
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